[發明專利]一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法

在審

• 申請號: 201710283945.2
• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN106908411A
• 公開（公告）日: 2017-06-30
• 發明（設計）人: 黃鋼;王海波;楊培強;徐軍;胡兆燕
• 申請（專利權）人: 上海健康醫學院;南京瑞柯徠姆環保科技有限公司
• 主分類號: G01N21/359
• 分類號: G01N21/359;G01N21/3577
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于血液檢測領域，涉及一種血清中尿素氮含量的測定方法，尤其涉及一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法。

背景技術

尿素是人體蛋白質代謝的主要終末產物，氨基酸脫氨基產生NH₃和C0₂，兩者在肝臟中合成尿素。通常腎臟為排泄尿素的主要器官，尿素從腎小球濾過后在各段小管均可重吸收。各種腎實質性病變，如腎小球腎炎、間質性腎炎、急慢性腎功能衰竭等均可使血尿素氮增高。如能排除腎外因素，尿素氮可作為尿毒癥診斷指標之一。

血清(或血漿)中的尿素氮，在尿素氮試劑的酸性環境中與二乙酰-肟(DAM)共沸后，可縮合成一紅色化合物，稱為fearon反應。其顏色的深淺與血清(或血漿)中尿素氮的含量成正比，與同樣處理的尿素氮標準液比色，即可測算出血清(或血漿)中尿素氮的含量。由于此方法干擾性大，目前臨床實驗室多采用尿素酶偶聯法，用尿素酶分解尿素產生氨，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下使NADH氧化為NAD⁺時，通過340nm吸光度的降低值可計算出尿素氮含量。但是，尿素酶偶聯法測試時間較長，步驟繁瑣，檢測效率慢，且大量的人為操作易造成檢測結果不準確。

發明內容

本發明提供一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法，以克服現有技術的缺陷。

為實現上述目的，本發明提供一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法，步驟一、配制若干個含有不同尿素氮含量的血清標定液；步驟二、用近紅外光譜儀對每個血清標定液進行光譜采集；步驟三、根據血清標定液的近紅外光譜，建立鑒別模型；步驟四、用近紅外光譜儀對待檢測的血清樣品進行光譜采集，將血清樣品的光譜與鑒別模型對比，獲得血清樣品中的尿素氮含量。

其中，步驟一中，血清標定液是指已知其尿素氮含量的血清樣品。且血清標定液的數量需滿足建立模型的要求。優選的，血清標定液的數量至少為30個。若干個血清標定液的尿素氮含量的范圍為2-7mmol/L。

步驟三中，鑒別模型是指血清標定液的光譜與血清標定液中尿素氮含量之間的對應關系。

進一步，本發明提供一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，步驟一是采用尿素酶偶聯法測定血清中的尿素氮含量，并配制出不同尿素氮含量的血清標定液；尿素酶偶聯法是指采用尿素酶、谷氨酸脫氫酶、α-酮戊二酸、NADH與血清混合，根據NADH與血清反應前后的變化，即依據NADH與血清反應前后的結果，得到血清中尿素氮的含量。

其中，上述血清可以為采集而來的多份血清，用以配制血清標定液。

進一步，本發明提供一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，尿素酶偶聯法的具體步驟為：步驟a、試劑與血清混合，并于36～38℃溫浴3-6min；試劑包括尿素酶、谷氨酸脫氫酶、α-酮戊二酸和NADH；步驟b、在340nm波長處測量試劑和血清的混合液中NADH的吸光度下降速率，并與相同處理的尿素氮標準液比較，計算獲得樣品中尿素氮的含量。

其中，步驟b中，“與相同處理的尿素氮標準液比較”是指：配置尿素氮標準液，加入試劑，混合均勻并溫浴，其中，尿素氮標準液與血清等量，試劑的加入量與其加入至血清中的量相等，溫浴溫度和時間也與樣品的處理條件相同。然后，在340nm波長處測量試劑和尿素氮標準液的混合液中NADH的吸光度下降速率，由于尿素氮標準液的濃度已知，通過計算可知血清中尿素氮的含量。并且，尿素氮標準液可以與血清同時處理，以使檢測結果更加準確并節省檢測時間。

尿素氮標準液的配制方法為：稱取尿素，溶于無氨去離子水中，并用無氨去離子水定容。尿素氮標準液的濃度為6～8mmol/L。

進一步，本發明提供一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，試劑還包括磷酸鹽緩沖液；磷酸鹽緩沖液的pH指為7.7±0.2；優選的，磷酸鹽緩沖液為TRIS-鹽酸緩沖劑。

進一步，本發明提供一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，試劑還包括防腐劑；優選的，防腐劑為ProcIin-300。

進一步，本發明提供一種血清中尿素氮含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，試劑由磷酸鹽緩沖液30～70nmol/L、尿素酶4000～6000U/L、谷氨酸脫氫酶8000～10000U/L、α-酮戊二酸140～180nmol/L、NADH2.0～4.0nmol/L、防腐劑150～250μl/L組成；試劑與血清的體積比為1:70～80。