[發明專利]一種細胞色素C溶液澄清方法

在審

• 申請號: 201710281019.1
• 申請日: 2017-04-19
• 公開（公告）號: CN107163137A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 曹紅光;祁靜
• 申請（專利權）人: 煙臺東誠藥業集團股份有限公司
• 主分類號: C07K14/80
• 分類號: C07K14/80;C07K1/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物化工技術領域，尤其是涉及一種細胞色素C溶液澄清方法。

背景技術

細胞色素C廣泛分布于動物、植物和酵母等微生物中，定位在線粒體內膜的外表面。因分子中有多個堿性氨基酸(特別是Lys)殘基，在生理pH環境帶正電荷，可通過靜電相互作用與膜磷脂質相締合，能被H⁺和金屬離子從膜上置換取代下來。

現有細胞色素C提取方法為硫酸溶液提取、沸石捕集、硫酸銨分級、三氯乙酸沉淀以及離子交換色譜純化等五大步驟。硫酸溶液提取后，經過過濾除渣料液仍然難以做到澄清，因此影響沸石捕集細胞色素C的效率。

如果能在沸石捕集細胞色素C之前將料液處理澄清，可以用精濾的方法，但是這種方法對于大量的料液處理速度有限，因此如果能夠加入絮凝劑使料液快速絮凝澄清，那么經過簡單的過濾即可快速得到澄清的料液。

發明內容

本發明的目的在于改進已有技術的不足而提供一種有效的細胞色素C溶液澄清方法?，F有細胞色素C生產工藝中料液的澄清方法是粗濾和精濾。商品用細胞色素C使用動物心肌提取，提取的溶液一般含有很多不溶物，直接過濾速度較慢。如果加入絮凝劑使其中的不溶成分快速絮凝沉降，那么將提高過濾速度和過濾質量。選擇殼聚糖作為絮凝劑，是由于其來自于天然產物，操作步驟簡單、沒有毒副作用、達到絮凝效果后能夠完全除去、不影響最終產品質量，所形成的絮凝沉淀能夠保持很長一段時間，即使輕微攪動也不會被打散。

本發明的目的是這樣實現的，動物心肌提取出的細胞色素C溶液，加入殼聚糖作為絮凝劑，攪拌至不溶物絮凝成團后，靜置適當時間后過濾澄清即可。

殼聚糖的加入量是澄清的重要的影響因素。殼聚糖的加入重量為細胞色素C溶液重量的0.01～0.03％。針對于細胞色素C溶液而言，少于0.01％的加入量通常不足以將所有不溶物沉淀下來，多于0.03％的加入量，有可能會造成殼聚糖的浪費，并且有可能影響細胞色素C收率。

脫乙酰度70～90％的殼聚糖比較常見，粘度比較穩定，容易在不同工藝中均達到穩定的絮凝效果。但是在本發明中使用脫乙酰度較高的殼聚糖，這是因為實驗發現不同脫乙酰度的殼聚糖中，脫乙酰度較高的殼聚糖能夠以最快的速度在細胞色素C溶液中絮凝，可使工藝快速進行，處理成噸的料液時分外有利。殼聚糖脫乙酰度范圍91～95％。殼聚糖在使用前需預先溶解。由于殼聚糖溶解于酸性環境，因此使用鹽酸或醋酸來調節殼聚糖溶液pH，使其穩定在3.0～3.5。這個pH范圍下，殼聚糖可以充分溶解，并且不會很快分解導致粘度降低，從而影響絮凝效果。殼聚糖配制成水溶液濃度應限定在3％，過低的濃度在生產中不易操作，過高的濃度會增加殼聚糖的溶解時間。殼聚糖配制成水溶液后應盡快使用，存放時間不宜超過12小時。較高的離子強度不利于殼聚糖的絮凝，處理的料液應避免高鹽環境。殼聚糖會溶于酸性溶液，因此為了生產絮凝，細胞色素C溶液應保持偏中性或堿性環境。將細胞色素C溶液調節pH 7.0～8.0為宜。

具體實施方式：

實施例1，一種細胞色素C溶液澄清方法，將5kg豬心絞碎，加入適量濃度為2％硫酸溶液，pH值控制在3.5，室溫提取2小時，粗濾去渣，得到提取液50升，用氨水調節pH 7.0，此時料液濁度大于200NTU。

現場配制殼聚糖溶液，取5克脫乙酰度91％的殼聚糖，置于0.17升純化水中，用鹽酸維持pH3.0，攪拌使殼聚糖溶解。將殼聚糖溶液緩緩加入細胞色素C水解液中并保持攪拌，約10分鐘后出現可見絮凝后停止攪拌并靜置，在不同靜置時間取上清液，使用中速定性濾紙在重力作用下過濾后檢測濁度如下表。

實施例2，一種細胞色素C溶液澄清方法，細胞色素C溶液提取方法同實施例1，用氨水調節pH 7.5，此時料液濁度大于200NTU。

現場配制殼聚糖溶液，取10克脫乙酰度93％的殼聚糖，置于0.33升純化水中，用醋酸維持pH3.2，攪拌使殼聚糖溶解。將殼聚糖溶液緩緩加入細胞色素C水解液中保持攪拌，約10分鐘后出現可見絮凝后停止攪拌并靜置，在不同靜置時間取上清液，使用中速定性濾紙在重力作用下過濾后檢測濁度如下表。

實施例3，一種細胞色素C溶液澄清方法，細胞色素C溶液提取方法同實施例1，用氨水調節pH 8.0，此時料液濁度大于200NTU。