[發明專利]一株維生素B2單克隆抗體雜交瘤細胞株GZ-4及其應用

有效

• 申請號: 201710280929.8
• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN106929479B
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發明（設計）人: 匡華;曾露;胥傳來;徐麗廣;劉麗強;宋珊珊;吳曉玲;胡擁明;鄭乾坤
• 申請（專利權）人: 江南大學;得利斯集團有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/82;G01N33/577
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

一株維生素B2單克隆抗體雜交瘤細胞株GZ?4及其應用，屬于食品安全免疫檢測領域。本發明維生素B2單克隆抗體雜交瘤細胞株GZ?4，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏編號為CGMCC No.13094。此細胞株分泌的單克隆抗體，對維生素B2具有較好的特異性和檢測靈敏度（IC₅₀值為11 ng/mL），可以用于對牛奶、維生素飲料、嬰幼兒食品中維生素B2的檢測，具有實際應用價值。

技術領域

本發明涉及一株維生素B2單克隆抗體雜交瘤細胞株GZ-4及其應用，屬于食品安全免疫檢測領域。

背景技術

維生素B2，又名核黃素，為體內黃酶類輔基的組成部分（黃酶在生物氧化還原中發揮遞氫作用）。當缺乏維生素B2時，就影響機體的生物氧化，使代謝發生障礙。其病變多表現為口、眼和外生殖器部位的炎癥，如口角炎、唇炎、舌炎、眼結膜炎和陰囊炎等。維生素B2是水溶性維生素，容易消化和吸收，不能在體內蓄積，因此只有通過日常膳食攝取維生素B2，維生素B2廣泛存在于酵母、肝、腎、蛋、奶、大豆等中。兒童生長發育期、婦女妊娠哺乳期、創傷期由于機體需求量大，日常飲食攝入可能無法滿足需要，因此需要補充維生素B2。

中國居民膳食維生素B2推薦攝入量男士1.5 mg/天，女士1.2 mg/天，妊娠期間需要1.6 mg/天，哺乳6個月內要攝取1.8 mg/天，之后的6個月為1.7 mg/天。食品營養強化劑使用衛生標準GB14880-94規定了維生素B2的用量，維生素B2強化嬰兒食品配方中需要8～14 mg/kg，妊娠食品配方4～22 mg/kg。

目前維生素B2含量分析方法有微生物法、分光光度法、色譜法。色譜法應用最為廣泛，包括氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣質聯用(GC-MS)、液質聯用 (LC-MS)、超臨界流體色譜(SFC)、毛細管電泳(CE)等的儀器方法，但這些方法需要昂貴的儀器、專業的操作人員，且樣品前處理復雜，成本高，時間長，不能實現大量樣品的快速檢測，因此建立快速簡便的維生素B2檢測方法具有重要意義。酶聯免疫法（ELISA）是一種極為高效、敏感、快速的檢測方法，檢測時對樣本的純度要求不高而且操作簡便，適用于大量樣本的現場快速檢測。建立高效的免疫學檢測方法，篩選高特異性的單克隆抗體是重要前提。

發明內容

本發明的目的是提供一株維生素B2單克隆抗體雜交瘤細胞株GZ-4，由該細胞株制備的抗體對維生素B2具有較好特異性和檢測靈敏度，可以用來建立維生素B2的免疫學檢測方法。

本發明的技術方案：一株維生素B2單克隆抗體雜交瘤細胞株GZ-4，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏編號為CGMCC No.13094。

維生素B2單克隆抗體，它由所述保藏編號為CGMCC No.13094的維生素B2單克隆抗體雜交瘤細胞株GZ-4分泌產生。

所述維生素B2單克隆抗體的應用，用于食品安全檢測中維生素B2的分析檢測。

本發明提供的維生素B2單克隆抗體雜交瘤細胞株GZ-4的制備基本步驟為：

1）完全抗原的合成：

稱取8.42 mg VB2（維生素B2）于1 mL無水DMF中，加入18.15 mg CDI（羰基二咪唑），40℃水浴避光攪拌，活化1 h；另取5 mg BSA溶解于2 mL、0.05M、pH 9.6的CB溶液中，將上述活化后的VB2溶液緩慢逐滴加入BSA溶液中，室溫攪拌反應過夜，即得VB2完全抗原混合液，4℃透析3天，通過透析分離完全抗原和未偶聯的小分子半抗原，并通過紫外吸收掃描方法鑒定；