[發(fā)明專利]一種測定梔子黃中黃曲霉毒素B1的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710280399.7
• 申請日: 2017-04-26
• 公開（公告）號: CN107102078B
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓海濤;金子恒;丁飛;董理;張玉琴;李軒;焦軍偉;馬國徽;宋超;萬劍峰
• 申請（專利權(quán)）人: 河南中大恒源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 11279 北京中譽威圣知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 蔣常雪<國際申請>=<國際公布>=<進(jìn)入

本發(fā)明屬于食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種測定梔子黃中黃曲霉毒素B₁的方法，所述的方法包括如下步驟：稱取一定量的梔子黃粉狀樣品，采用三氯甲烷進(jìn)行萃取、濃縮、凈化并過濾，之后再用超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜對其進(jìn)行測定。本發(fā)明利用黃曲霉毒素B₁難溶于水而易溶于三氯甲烷，而梔子黃易溶于水難溶于三氯甲烷的特性，對梔子黃樣品水溶液用三氯甲烷進(jìn)行液液萃取，克服了因樣品基質(zhì)對目標(biāo)物的干擾，降低了基質(zhì)效應(yīng)的影響，可有效避免假陽性或假陰性結(jié)果，定性準(zhǔn)確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品添加劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種測定梔子黃中黃曲霉毒素B₁的方法。

背景技術(shù)

黃曲霉毒素B₁對包括人和若干動物具有強烈的毒性，是已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性最強的一種，對人畜危害極大。黃曲霉毒素是黃曲霉、寄生曲霉等產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素廣泛存在于土壤、大豆、稻谷、玉米、通心粉、調(diào)味品、牛奶及其制品、食用油、肉類(魚)制品、花生和核桃中等動植物和各種堅果中，特別是花生和核桃中。當(dāng)人攝入含黃曲霉毒素B₁污染的食物，可發(fā)生急性肝炎、出血性壞死等急性中毒，甚至死亡；當(dāng)微量持續(xù)攝入，可造成慢性中毒，生長障礙，致癌、致畸等。黃曲霉毒素在農(nóng)產(chǎn)品中幾乎無法避免，在天然食物中以黃曲霉毒素B₁最為多見，危害性最強，國家質(zhì)檢總局規(guī)定黃曲霉毒素B₁是大部分食品的必檢項目之一。我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定：玉米、花生油、花生及其制品中黃曲霉毒素不得>20μg/kg；大米、其它食用油不得>10μg/kg；其它糧食、豆類、發(fā)酵食品不得 >5μg/kg；嬰兒代乳食品不得檢出黃曲霉毒素。歐盟等國于2002年對糧食，花生及其產(chǎn)品中的黃曲霉毒素B₁含量規(guī)定，人類直接使用的花生中黃曲霉毒素B₁含量需≤2μg/kg，作為食品原料進(jìn)口的花生黃曲霉毒素B₁含量需≤8μg/kg。人們?nèi)羰称分悬S曲霉毒素含量超出一定標(biāo)準(zhǔn)，就會直接威脅到人的健康。

現(xiàn)有黃曲霉毒素B₁的檢測方法包括薄層層析法、精密儀器分析法和免疫學(xué)分析法。

薄層層析法不需要特殊的儀器設(shè)備，一般實驗室都可進(jìn)行，但試劑用量大、操作繁瑣、其它組分干擾嚴(yán)重、準(zhǔn)確性差，不能準(zhǔn)確定量，且對實驗人員和環(huán)境的污染危害較大，此法已逐漸被淘汰。

精密儀器分析法包括熒光分光光度法和高校液相色譜法，其靈敏度高，準(zhǔn)確性好，但儀器昂貴，要求黃曲霉毒素樣品純化程度高，樣品前處理過程繁瑣，耗時長，對實驗環(huán)境要求高，難以實現(xiàn)快速檢測。

免疫學(xué)分析法包括酶免疫法、放射免疫法和時間分辨熒光法，酶免疫法，具有特異性強、靈敏度高、成本低、適于批量檢測等優(yōu)點，但一般為定性或半定量方法，在檢測成分復(fù)雜的農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉毒素時易受干擾，并存在假陽性的比例較高，檢測準(zhǔn)確度不高等缺點。

放射免疫法與酶免疫法相似，但放射免疫法還存在放射污染，對操作者及環(huán)境容易帶來額外不利影響，應(yīng)用較少。時間分辨熒光法是今年已有應(yīng)用，檢測靈敏度比前兩者更高，但前處理仍較復(fù)雜，切所需儀器昂貴，限于醫(yī)學(xué)臨床診斷領(lǐng)域使用。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服傳統(tǒng)檢測方法處理繁瑣、定性不準(zhǔn)確、檢出限高(靈敏度差)等缺點，本發(fā)明提供了一種測定梔子黃中黃曲霉毒素B₁的方法，該方法步驟簡單、定性準(zhǔn)確、檢出限低(靈敏度高)，能滿足檢測梔子黃中黃曲霉毒素B₁的需求。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

一種測定梔子黃中黃曲霉毒素B₁的方法，所述的方法包括以下步驟：

1)提取梔子黃中黃曲霉毒素B₁：將梔子黃粉狀樣品與水混合，得到混合液，然后采用三氯甲烷萃取劑對混合液進(jìn)行萃取，得到萃取液，萃取液濃縮、凈化并過濾，得到待測液；