[發明專利]間充質干細胞分化為表皮細胞的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201710279215.5
• 申請日: 2017-04-25
• 公開（公告）號: CN106929469B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 湯蘇陽
• 申請（專利權）人: 徐子雁
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0775
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 王玉松;懷春穎

1.一種間充質干細胞分化為表皮細胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：將間充質干細胞加入誘導分化液中，于37℃、5%CO2飽和濕度的培養箱中，進行誘導分化；所述誘導分化液主要由分化組合物和DMEM培養基水溶液配置而成；配置5-10mg所述分化組合物所用的DMEM培養基水溶液的體積為1mL；所述DMEM培養基水溶液的濃度為10-25mg/mL，所述分化組合物主要由如下重量份數的成分制備而成：轉鐵蛋白1-3份、維生素C 0.5-1份、槲皮素5-10份、α-生育酚琥珀酸單酯2-5份、異銀杏雙黃酮10-15份、氫化卵磷脂1-3份和賴氨酸2-5份。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化組合物還包括重量份數為0.5-1份的麥芽糖醇、2-5份的磷酸二氫鉀、1-3份的瓊脂和2-3份的生物素。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化組合物還包括重量份數為1-3份的谷氨酸鈉、0.2-0.5份的磷酯酰絲氨酸和2-5份的氯化硒。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：在進行誘導分化之前對間充質干細胞進行擴增培養。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述擴增培養具體步驟為：將原代間充質干細胞接種于第一培養基中，在37℃、5%CO2、飽和濕度的條件下進行培養，8h后更換一半量的第一培養基，以后每隔4h更換2/3量的第一培養基，培養2天后，棄去未貼壁的細胞，將第一培養基更換成第二培養基，繼續培養3-5天，每隔一天更換全量第二培養基，培養完畢后，加入細胞消化液消化4min，收集間充質干細胞；所述第一培養基主要由第一培養組合物和DMEM培養基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第一培養組合物所用的DMEM培養基水溶液的體積為1mL，所述DMEM培養基水溶液的濃度為6.3-7.8mg/mL；第一培養組合物主要由如下重量份數的成分制備而成：成纖維細胞生長因子5-10份、谷氨酰胺2-5份、白藜蘆醇2-5份、維生素E 1-3份、普魯蘭2-5份和枸櫞酸鈉0.5-2份；所述第二培養基主要由第二培養組合物和DMEM培養基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第二培養組合物所用的DMEM培養基水溶液的體積為1mL，所述DMEM培養基水溶液的濃度為5-7.5mg/mL；所述第二培養組合物主要由如下重量份數的成分制備而成：胎牛血清5-10份、甲殼糖1-3份、硝酸銨0.5-1份、鉬酸鈉0.5-2份、川芎嗪2-5份和L -抗壞血酸- 2-磷酸鎂2-5份。

6.一種間充質干細胞分化為表皮細胞的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括盒體和位于盒體內部的若干試劑瓶，若干所述試劑瓶內分別盛裝有誘導分化液、第一培養基、第二培養基和細胞消化液，所述所述誘導分化液主要由分化組合物和DMEM培養基水溶液配置而成；配置5-10mg所述分化組合物所用的DMEM培養基水溶液的體積為1mL；所述DMEM培養基水溶液的濃度為10-25mg/mL，所述分化組合物主要由如下重量份數的成分制備而成：轉鐵蛋白1-3份、維生素C 0.5-1份、槲皮素5-10份、α-生育酚琥珀酸單酯2-5份、異銀杏雙黃酮10-15份、氫化卵磷脂1-3份和賴氨酸2-5份；所述第一培養基主要由第一培養組合物和DMEM培養基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第一培養組合物所用的DMEM培養基水溶液的體積為1mL，所述DMEM培養基水溶液的濃度為6.3-7.8mg/mL；所述第二培養基主要由第二培養組合物和DMEM培養基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第二培養組合物所用的DMEM培養基水溶液的體積為1mL，所述DMEM培養基水溶液的濃度為5-7.5mg/mL；所述第一培養組合物主要由如下重量份數的成分制備而成：成纖維細胞生長因子5-10份、谷氨酰胺2-5份、白藜蘆醇2-5份、維生素E 1-3份、普魯蘭2-5份和枸櫞酸鈉0.5-2份；所述第二培養組合物主要由如下重量份數的成分制備而成：胎牛血清5-10份、甲殼糖1-3份、硝酸銨0.5-1份、鉬酸鈉0.5-2份、川芎嗪2-5份和L -抗壞血酸- 2-磷酸鎂2-5份。