[發明專利]一種6-芐氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法

有效

• 申請號: 201710277697.0
• 申請日: 2017-04-25
• 公開（公告）號: CN107022023B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 胥傳來;李月;匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/34;C07K1/107
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

一種6?芐氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法，屬于生物化工技術領域。本發明以6?氯嘌呤和4?（氨甲基）苯甲酸取代得到含羧基的產物6?BA即為半抗原。采用碳二亞胺法將半抗原6?BA與載體蛋白BSA偶聯，用紫外法表征，并測定偶聯物的偶聯比。本發明成功合成了6?芐氨基腺嘌呤人工抗原6?BA?BSA，合成步驟簡單、安全、有效，完全可用于免疫分析中，為以后的研究提供了必需的人工抗原。

技術領域

本發明涉及一種6-芐氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法，屬于生物化工技術領域。

背景技術

6-芐氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA）是一種人工合成的植物生長激素，主要作為促長劑和保鮮劑使用，能夠促進與調節植物生長發育以及蔬菜、水果的保鮮和儲存。6-BA是第一個人工合成的細胞分裂素，主要成份是嘌呤類生物堿和一些無機物，在細胞分裂素中具有較高活性。6-BA作為植物促長劑和果蔬保鮮劑的主要成分，已在國內外進入應用階段。作為植物促長劑使用，可以提高種子發芽率，促進幼苗生長，最終提高產率，常被用于促進豆芽的生長，提高煙葉的產量等。在作物生長過程中，6-BA能夠起到將氨基酸生長素、無機鹽等向植物的莖、根等部位輸運的作用，改善其生長。另外6-BA還能夠通過抑制植物內的葉綠素、核酸、蛋白質分解、抑制呼吸等方式對作物防衰保鮮，因此6-BA適用于各種綠葉蔬菜（如青椒、黃瓜、豆角等）貯藏前使用。

6-芐氨基腺嘌呤已被廣泛應用于農業、果樹栽培和園藝等領域。因此 6-BA 在市售水果和蔬菜中一般都有一定的殘留，而人體攝入6-BA過多會刺激食道、胃黏膜，造成食道、胃黏膜損傷，出現惡心、嘔吐等現象。國家標準 GB2760-1996 將6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)作為允許使用的食品添加劑，同時也規定了其最高允許使用限量（0.01 g/kg）和最高允許殘留量（0.20 mg/kg）。然而，目前一方面國內外至今尚未建立6-芐氨基腺嘌呤進出口產品質量的檢測標準及其測定方法，這給6-BA的生產使用和進出口貿易以及食品衛生監督與監測工作帶來很大的阻礙；另一方面食品中6-BA殘留量的檢測方法也沒有國家標準。這給6-芐氨基腺嘌呤食品添加劑生產使用和進出口貿易以及食品衛生監測工作帶來很大的困難。為了維護廣大消費者的利益，有必要建立一種針對6-BA的高效、快速的檢測方法，而酶聯免疫法（ELISA）前處理簡單，成本低，可實現大量樣品的快速檢測，且檢測時對樣本的純度要求不高。因此，建立高效的免疫學檢測方法很有必要，而建立此方法的一個重要前提即需篩選出針對6-芐氨基腺嘌呤的高特異性單克隆單體。

發明內容

本發明的目的是提供一種6-芐氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法，所制備的產品用于6-芐氨基腺嘌呤免疫分析方法研究，為今后的研究提供了必需的人工抗原。

本發明的技術方案，一種6-芐氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法，其由6-氯嘌呤和4-（氨甲基）苯甲酸取代得到具有羧基的產物，即半抗原6-BA，用碳二亞胺法將半抗原6-BA與載體蛋白偶聯，即得到6-芐氨基腺嘌呤人工抗原。

1、6-芐氨基腺嘌呤人工抗原的制備步驟為：

（1）半抗原6-BA的合成：

合成路線如下：

化合物2到化合物6-BA是純化的過程；

稱取化合物1 6-氯嘌呤2.00 g（12.9 mmol）和三乙胺 2.60 g（25.6 mmol），溶解于20 mL的叔丁醇中。在N₂的保護下，向該溶液中加入4-（氨甲基）苯甲酸1.96 g （12.9mmol），回流72h。冷卻至室溫，過濾，獲得2.10 g 黃色固體，即化合物2；