[發(fā)明專利]一種測定BACE1酶切NRG1活性的檢測方法及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710277553.5
• 申請日: 2017-04-25
• 公開（公告）號: CN108732355B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發(fā)明（設計）人: 李人;申勇;張崢嶸;高峰
• 申請（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學附屬北京安定醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/573
• 代理公司: 北京知元同創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 劉元霞;牛艷玲

1.BACE1酶切多肽底物在制備精神分裂癥診斷試劑或試劑盒中的應用，所述BACE1酶切多肽底物的結(jié)構(gòu)式為：R₁-GI-EFME-AEK-R₄，當R₁為熒光發(fā)射基團時，R₄為熒光猝滅基團或熒光發(fā)射基團；或者，當R₁為熒光猝滅基團時，R₄為熒光發(fā)射基團；E為谷氨酸，F(xiàn)為苯丙氨酸，M為甲硫氨酸，G為甘氨酸，I為異亮氨酸，A為丙氨酸，K為賴氨酸。

2.如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述熒光發(fā)射基團為：羅丹明類化合物、熒光素類化合物、BODIPY類化合物、EDANS類化合物、香豆素類化合物、對甲氨基酚類化合物、花菁類化合物、吖啶類化合物、異吲哚類化合物、丹酰類化合物、氨基鄰苯二甲酸酰肼類化合物、鄰氨基苯甲酸類化合物、氨基鄰苯二甲酰亞胺類化合物、氨基萘二甲酰亞胺類化合物、氨基苯并呋喃類化合物、氨基喹啉類化合物或二氰基氫醌類化合物；

所述熒光猝滅基團為：硝基苯基、硝基芐氧基羰基、硝基苯甲酰基等硝基化芳香族化合物、靛蘭類化合物、苯并醌類化合物、蒽醌類化合物、偶氮化合物、茚苯胺類化合物、或者二或三苯基甲烷類化合物。

3.如權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于，所述熒光發(fā)射基團為魯米諾、異魯米諾、羅丹明110、羅丹明6G、羅丹明123、羅丹明B、羧基四甲基羅丹明、熒光素、異硫氰酸熒光素、5-羧基熒光素、6-羧基熒光素、四氯熒光素、六氯熒光素、羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基熒光素、或鄰氨基苯甲酸。

4.如權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于，所述熒光猝滅基團為：2,4-二硝基苯酚、硝基苯基、硝基芐氧基羰基、或者硝基苯甲酰基。

5.如權(quán)利要求1所述的應用，所述的BACE1酶切多肽底物為(Abz)-GIEFMEAEK-(Dnp)-NH₂、(Abz)-GIEFMEAEK-(Dnp)-COOH、(Dnp)-GIEFMEAEK-(Abz)-NH₂、或(Dnp)-GIEFMEAEK-(Abz)-COOH。

6.如權(quán)利要求1-5任一項所述的應用，所述精神分裂癥是發(fā)病早期的精神分裂癥，或者重癥精神分裂癥。

7.如權(quán)利要求1-5任一項所述的應用，所述精神分裂癥的診斷是針對患有精神分裂癥或具有發(fā)生精神分裂癥可能性的人展開的；所述具有發(fā)生精神分裂癥可能性的人是指其存在精神分裂癥家族遺傳性的人。

8.如權(quán)利要求1-5任一項所述的應用，所述診斷試劑或診斷試劑盒中進一步包含緩沖液。

9.如權(quán)利要求8所述的應用，其特征在于，所述緩沖液的pH為2.9-4.6。

10.如權(quán)利要求9所述的應用，其特征在于，所述緩沖液的pH為2.9-4.0。

11.如權(quán)利要求10所述的應用，其特征在于，所述緩沖液的pH為2.9-3.5。

12.如權(quán)利要求8所述的應用，其特征在于，所述緩沖液為醋酸-醋酸鹽緩沖液，磷酸-磷酸鹽緩沖液，檸檬酸-檸檬酸鹽緩沖液，甘氨酸-鹽酸緩沖液，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，或者醋酸-氯化鈉緩沖液。

13.如權(quán)利要求8所述的應用，其特征在于，所述緩沖液為醋酸-氯化鈉緩沖液，含有50mM醋酸和100mM氯化鈉。

14.如權(quán)利要求1-5任一項所述的應用，所述診斷試劑或診斷試劑盒中進一步含有樣品裂解液，所述裂解液含有：Tris-HCl、NaCl、EDTA或其鹽、EGTA或其鹽、Na₃VO₄、甘油和TritonX-100。