[發明專利]CTLA-4基因的用途及相關藥物

在審

• 申請號: 201710277551.6
• 申請日: 2017-04-25
• 公開（公告）號: CN108728440A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 林菊芳;廖敬禮;袁紀軍;李宗然;張秀;石鈺
• 申請（專利權）人: 上海吉倍生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 李艷;許亦琳

1.一種分離的核酸分子，所述核酸分子包含：

a)雙鏈RNA，所述雙鏈RNA中含有能夠在嚴緊條件下與CTLA-4基因雜交的核苷酸序列；或者

b)shRNA，所述shRNA中含有能夠在嚴緊條件下與CTLA-4基因雜交的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述CTLA-4基因來源于人。

3.根據權利要求1所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述雙鏈RNA包含第一鏈和第二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補共同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與CTLA-4基因中的靶序列基本相同；所述shRNA包括正義鏈片段和反義鏈片段，以及連接所述正義鏈片段和反義鏈片段的莖環結構，所述正義鏈片段和所述反義鏈片段的序列互補，并且所述正義鏈片段的序列與CTLA-4基因中的靶序列基本相同。

4.根據權利要求1～3任一權利要求所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述CTLA-4基因中的靶序列選自如SEQ ID NO：1～134所示之任一序列或如SEQ ID NO：1～134所示之任一序列經過取代、缺失或添加一個或幾個堿基序列且具有與如SEQ ID NO：1～134所示之任一序列相同活性的序列。

5.根據權利要求1～3任一權利要求所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述雙鏈RNA為小干擾RNA，所述小干擾RNA第一鏈的序列如SEQ ID NO：135～268任一序列所示。

6.根據權利要求1～3任一權利要求所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述shRNA的序列如SEQ ID NO:269～402任一序列所示。

7.一種CTLA-4基因干擾核酸構建體，含有編碼如權利要求1～6任一權利要求所述分離的核酸分子中的shRNA的基因片段，能表達所述shRNA。

8.如權利要求7所述的CTLA-4基因干擾核酸構建體，其特征在于，所述CTLA-4基因干擾核酸構建體選自病毒載體或質粒載體。

9.如權利要求8所述的CTLA-4基因干擾核酸構建體，其特征在于，所述CTLA-4基因干擾核酸構建體選自慢病毒載體、腺病毒載體、逆轉錄病毒載體、AAV。

10.如權利要求9所述的CTLA-4基因干擾核酸構建體，其特征在于，所述慢病毒載體選自：pLKO.1-puro、pLKO.1-CMV-tGFP、pLKO.1-puro-CMV-tGFP、pLKO.1-CMV-Neo、pLKO.1-Neo、pLKO.1-Neo-CMV-tGFP、pLKO.1-puro-CMV-TagCFP、pLKO.1-puro-CMV-TagYFP、pLKO.1-puro-CMV-TagRFP、pLKO.1-puro-CMV-TagFP635、pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP、pLKO.1-puro-UbC-TagFP635、pLKO-puro-IPTG-1xLacO、pLKO-puro-IPTG-3xLacO、pLP1、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BLOCK-iT-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNA1.2/V5-GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP或pLenti6.2/N-Lumio/V5-GW/lacZ中的任一。

11.一種CTLA-4基因干擾慢病毒，由權利要求7～10任一權利要求所述干擾核酸構建體在慢病毒包裝質粒、細胞系的輔助下，經過病毒包裝而成。

12.如權利要求1～6任一權利要求所述的分離的核酸分子、權利要求7～10任一權利要求所述CTLA-4基因干擾核酸構建體，和/或權利要求11所述的CTLA-4基因干擾慢病毒在制備T細胞活化促進劑中的用途。