[發明專利]一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法

在審

• 申請號: 201710273256.3
• 申請日: 2017-04-25
• 公開（公告）號: CN107287188A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 韋玉軍;李航;王文娟;蘇軍;吳遠航
• 申請（專利權）人: 安徽安龍基因醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙)33240
• 代理人: 王桂名

1.一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法，其特征在于：具體步驟為：

(1)、取1-5g新鮮或者-80℃冷藏的紅景天組織，加入液氮，研磨成粉，并迅速轉移至預冷的2.0ml離心管中；

(2)、加入900ul CTAB提取液，混勻，65℃裂解10min，裂解時每管不多于0.2g，期間輕柔顛倒混勻2-3次；

(3)、將苯酚、氯仿和異戊醇混合在一起，得到苯酚、氯仿和異戊醇的混合液，向步驟(1)中制備得到的產品中加入等體積的苯酚、氯仿和異戊醇的混合液，渦旋振蕩15～30sec，4℃下10,000g離心10min，取上清700ul移入新的1.5ml離心管，再加入等體積的氯仿與異戊醇的混合液，渦旋振蕩15～30sec，4℃下10,000g離心10min；

(4)、取上清1ml移入新的1.5ml離心管，加1/3體積8.0M Licl,顛倒混勻，-20℃過夜；

(5)、4℃下10,000g離心30min，棄去上清；

(6)、采用1ml 70％乙醇洗滌沉淀2-3次，4℃下10,000g離心10min，棄去上清，然后于室溫放置5-10分鐘使其晾干；

(7)、加入15ul的無核酸酶水溶解即可。

2.根據權利要求1所述的一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法，其特征在于：所述的步驟(1)中，將紅景天組織在研鉢中研磨成粉。

3.根據權利要求1所述的一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法，其特征在于：所述的步驟(2)中，在加入CTAB提取液之前，先將CTAB提取液預熱至65℃，并且加入質量濃度為5％的巰基乙醇。

4.根據權利要求1或3所述的一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法，其特征在于：所述的步驟(2)中，所述的CTAB提取液有以下組分配置而成：2％CTAB、2％PVP、100Mm Tris-HCl、25Mm EDTA、2M NaCl。

5.根據權利要求4所述的一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法，其特征在于：所述的Tris-HCl的Ph為8.0，所述的EDTA的Ph為8.0。

6.根據權利要求1所述的一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法，其特征在于：所述的步驟(3)中，所述的苯酚、氯仿和異戊醇的混合液中，按照體積比，苯酚：氯仿：異戊醇為25:24:1，所述的氯仿與異戊醇的混合液，中，按照體積比，氯仿：異戊醇為24:1。

7.根據權利要求1所述的一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法，其特征在于：所述的步驟(6)中，洗滌沉淀之前，需要先對乙醇進行預冷，所述的70％的乙醇是由7份的無水乙醇和3份的水混合而成，所述的水為用0.1％的DEPC處理并經高壓滅菌的純水。

8.根據權利要求1所述的一種改良CTAB抽提紅景天RNA的方法，其特征在于：所述的步驟(9)中，在將無核酸酶水加入吸附膜中間部位時，需要先將無核酸酶水預熱至65℃。