[發明專利]基于適體和金磁納米顆粒的細胞因子TNF-α的檢測方法

有效

• 申請號: 201710271468.8
• 申請日: 2017-04-24
• 公開（公告）號: CN106918633B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 繆鵬;唐玉國;陳錫峰;楊大威;郭振振
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

1.一種用于非疾病診斷的基于適體和金磁納米顆粒的細胞因子TNF-α的檢測方法，其特征在于，包括：

1)以磁性玻碳電極作為工作電極，對磁性玻碳電極進行預處理；

2)將金修飾于Fe₃O₄納米顆粒，制得金磁納米顆粒；

3)將DNA探針1修飾于所述金磁納米顆粒表面；

4)將DNA探針2與所述金磁納米顆粒表面的DNA探針1進行雜交反應，以在所述金磁納米顆粒表面形成互補配對的DNA雙鏈；

5)將所述金磁納米顆粒通過磁場作用吸附于所述磁性玻碳電極表面；

6)將所述磁性玻碳電極插入待測液中進行反應，并采集相應電化學響應值，根據電化學響應值與細胞因子TNF-α濃度的對應關系，獲得待測液中細胞因子TNF-α的濃度；

其中，所述DNA探針1的序列為5’-SH-TTTTTTTTGTCGCCGACTGCGCCATC-3’；

所述DNA探針2的序列為5’-MB-TGGTGGATGGCGCAGTCGGCGACAA-3’；其中，MB為電信號分子亞甲基藍；

所述DNA探針1的5’端修飾有巰基，以與所述金磁納米顆粒表面發生共價鍵合，并組裝DNA雙鏈；所述DNA探針2的序列含有所述細胞因子TNF-α的適體序列，以與待測樣本中的所述細胞因子TNF-α結合，以破壞所述DNA雙鏈結構，使得所述DNA探針2游離，電極表面的所述亞甲基藍數量大幅減少，從而獲得的峰電流降低，通過分析降低值，實現對所述細胞因子TNF-α的定量分析。

2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟1)中，對磁性玻碳電極進行預處理包括：

將磁性玻碳電極浸泡于水虎魚洗液中，以除去電極表面吸附的雜質；其中，以體積比為計，所述水虎魚洗液的組成為98％H₂SO₄∶30％H₂O₂＝3∶1。

3.如權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，對磁性玻碳電極進行預處理還包括：將磁性玻碳電極用碳化硅砂紙打磨至呈鏡面光滑，隨后將磁性玻碳電極分別在乙醇和蒸餾水中超聲清洗。

4.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，對磁性玻碳電極進行預處理還包括：將磁性玻碳電極用0.5M H₂SO₄溶液清洗，隨后用氮氣干燥以待后用。

5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述金磁納米顆粒通過以下制備方法獲得：

將Fe₃O₄粉末溶于150mL雙蒸水中，超聲分散；

將氯金酸加入到Fe₃O₄溶液中，在0℃下攪拌1小時；

將NaBH₄緩慢加入到上述混合液中，在0℃下反應15分鐘；

磁性分離，乙醇清洗3次后在50℃下真空干燥得金磁納米顆粒。

6.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟3)中，DNA探針1的修飾方法為：將金磁納米顆粒溶于雙蒸水中，加入DNA探針1，放置16小時后使用老化液進行老化；1天后通過磁性分離除去液體，使用含有0.25MNaCl的10mM磷酸緩沖液清洗和復溶；其中，所述老化液是含有0.1M KNO₃的10mM磷酸緩沖液。