[發(fā)明專利]一種豬皮皮膚表皮和真皮層分離取材的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710271388.2
• 申請(qǐng)日: 2017-04-24
• 公開（公告）號(hào): CN106895990A
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余啟枝;郟自明;黎炎梅;楊文祥;鄭艷華;王軼;童瑤;劉家發(fā);唐利軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖北省疾病預(yù)防控制中心
• 主分類號(hào): G01N1/06
• 分類號(hào): G01N1/06
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11401
• 代理人: 楊采良

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于皮膚藥代動(dòng)力學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種豬皮皮膚表皮和真皮層分離取材的方法。

背景技術(shù)

皮膚藥代動(dòng)力學(xué)是研究藥物及其代謝物在皮膚局部的吸收、分布、代謝和消除過程的一門科學(xué)，其對(duì)于皮膚局部外用藥物的研發(fā)和評(píng)價(jià)具有極其重要的指導(dǎo)作用。不同皮膚疾病的病變累及部位不同，有的病變僅累及表皮層，有的病變部位不僅可累及表皮層，還可深達(dá)真皮組織。因此，對(duì)于不同的適應(yīng)癥，應(yīng)針對(duì)其病變累及部位的不同，采用不同的取材方法進(jìn)行藥代試驗(yàn)，以觀察藥物能否達(dá)到病變部位，并測定在該部位的藥物濃度是否足以發(fā)揮療效。小型豬的皮膚與人的皮膚結(jié)構(gòu)較接近，常用于皮膚用藥臨床前藥理毒理研究。小型豬真皮與表皮之間沒有明顯的分界，肉眼無法判斷，而且表皮極薄，只有30-120μm，要精確地取到表皮和真皮組織，常規(guī)的技術(shù)方法無法實(shí)現(xiàn)。現(xiàn)有常用皮膚角質(zhì)層取材方法為膠帶粘貼法，在不同的給藥時(shí)間，利用膠帶反復(fù)黏貼角質(zhì)層進(jìn)行取樣，對(duì)黏下的角質(zhì)層中的藥物濃度進(jìn)行測定，可得出不同用藥時(shí)間角質(zhì)層內(nèi)的藥物濃度。這種方法的局限在于取樣位置表淺，僅適用作用于角質(zhì)層的藥物，不能適用于作用于表皮更深層(如基底層、棘狀層、顆粒層、透明層等)和真皮層的藥物；此方法影響因素很多，取樣時(shí)所用的壓力不同，每次取樣所貼下的角質(zhì)層量也不同。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：現(xiàn)有常用皮膚角質(zhì)層取材方法為膠帶粘貼法僅適用作用于角質(zhì)層-的藥物，不能適用于作用于表皮更深層(如基底層、棘層、顆粒層、透明層等)和真皮層的藥物，取樣時(shí)所用的壓力不同，每次取樣所貼下的角質(zhì)層量也不同，也就是說角質(zhì)層的厚度不一樣，進(jìn)而藥物的分布和含量也不同，常用的方法會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種豬皮皮膚表皮和真皮層分離取材的方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種豬皮皮膚表皮和真皮層分離取材的方法，所述豬皮皮膚表皮和真皮層分離取材的方法利用顯微鏡下精準(zhǔn)測量表皮層和真皮層的厚度，然后采用冰凍切片，將表皮和真皮分離取材。

進(jìn)一步，所述豬皮皮膚表皮和真皮層分離取材的方法包括以下步驟：

步驟一，從皮肌處將小型豬的表皮和真皮從皮膚上分離下；

步驟二，分離下來小型豬皮膚用硬紙板鋪平，用手術(shù)刀片將小型豬皮膚按井字形劃成方塊；

步驟三，放在-20℃冰箱中冷凍后，從硬紙板上取下皮膚，將皮膚表皮面貼在冷凍標(biāo)本托上，用冰凍切片機(jī)切去皮膚皮下組織，并保持切面平整；

步驟四，將去掉皮下組織的皮膚豎立粘貼在冷凍標(biāo)本托上，用冰凍切片機(jī)橫切皮膚組織，粘貼在載玻片上，0.1％蘇木素染色，甘油封片，20倍顯微鏡下觀察皮膚組織學(xué)結(jié)構(gòu)，分別測量表皮層和真皮層的厚度；

步驟五，然后將皮膚真皮面平整粘貼在冷凍標(biāo)本托上，用冰凍切片機(jī)縱切皮膚表皮層，切面厚度設(shè)置稍低于測量的表皮層厚度，切下的皮膚即為表皮層；

步驟六，再切去表皮和真皮交界的皮膚，剩余部分即為真皮層。

進(jìn)一步，所述用銳利手術(shù)刀片將小型豬皮膚按井字形劃成1.0cm*2.0cm的方塊。

進(jìn)一步，在-20℃條件下，用冰凍切片機(jī)切去皮膚皮下組織，并保持切面平整。

進(jìn)一步，用冰凍切片機(jī)橫切厚度為10μm的皮膚組織。

進(jìn)一步，所述再切去90μm的皮膚，皮膚剩余部分即為真皮層。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及積極效果為：利用顯微鏡下精準(zhǔn)測量表皮層和真皮層的厚度，然后采用冰凍切片技術(shù)，將表皮和真皮分離取材，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物皮膚分層分布的研究。本發(fā)明的方法科學(xué)、有效、精準(zhǔn)，無污染，對(duì)皮膚局部外用藥物臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究具有極其重要的意義。科學(xué)、影響因素少：首先通過顯微鏡精確測量表皮層厚度，再根據(jù)測量的結(jié)果精準(zhǔn)切下表皮層，切去表皮層和真皮層交界的部分，留取真皮層；操作較簡單、無污染。

利用本發(fā)明，可以將不同的豬皮不同厚度的角質(zhì)層和真皮層準(zhǔn)確的分離出來，更進(jìn)一步提高試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的豬皮皮膚表皮和真皮層分離取材的方法流程圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作詳細(xì)的描述。

如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例提供的豬皮皮膚表皮和真皮層分離取材的方法包括以下步驟：