[發(fā)明專利]減少炎性反應(yīng)的具有減少的脂磷壁酸的重組乳桿菌

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710266701.3
• 申請(qǐng)日: 2011-06-16
• 公開（公告）號(hào): CN107325979B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: T.R.克萊恩哈默;E.普菲勒;M.莫哈馬扎德
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北卡羅萊納州立大學(xué);西北大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/21;A61K35/744;A61K35/747;A61P29/00;A61P1/00;A61P1/04;A61P3/04;A61P1/12;A61P1/14;A61P1/10;C12R1/23
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 彭昶;李炳愛

提供用于治療或預(yù)防炎性病癥的方法和組合物。本發(fā)明組合物包含經(jīng)遺傳修飾以減少細(xì)胞表面上脂磷壁酸展示的重組細(xì)菌。本發(fā)明方法包括給予受試者經(jīng)修飾以減少細(xì)胞表面上脂磷壁酸展示的重組細(xì)菌。給予所述重組細(xì)菌促進(jìn)所需的治療反應(yīng)。所述重組細(xì)菌可以以單獨(dú)劑量或系列劑量給予。本發(fā)明方法在治療或預(yù)防多種炎性病癥包括，例如，治療或預(yù)防炎性腸病、結(jié)腸炎或克羅恩病中得到應(yīng)用。

本申請(qǐng)為分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)的申請(qǐng)日為2011年6月16日，申請(qǐng)?zhí)枮?01180039874.2(PCT/US2011/040674)，發(fā)明名稱為“減少炎性反應(yīng)的具有減少的脂磷壁酸的重組乳桿菌”。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于減少炎癥的方法和組合物。

對(duì)作為文本文件通過(guò)EFS-WEB提交的序列表的引用

序列表的正式副本作為文本文件通過(guò)EFS-Web與說(shuō)明書一起提交，其遵從美國(guó)信息交換標(biāo)準(zhǔn)碼(ASCII)，文件名稱為406734seqlist.txt，創(chuàng)建日期為2011年6月16日，大小為15.7 KB。通過(guò)EFS-Web提交的序列表為說(shuō)明書的一部分，因此通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中。

發(fā)明背景

腸道免疫穩(wěn)態(tài)的維持涉及細(xì)菌微生物區(qū)系、腸上皮與宿主先天免疫細(xì)胞之間的平衡相互作用。這些免疫相互作用的失調(diào)可導(dǎo)致免疫功能障礙并引起明顯的炎癥，這是人炎性腸病(IBD)，包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病通常所具有的。盡管還未完全理解IBD的細(xì)胞和分子機(jī)制，但數(shù)據(jù)表明炎性細(xì)胞因子(例如IL-12)誘導(dǎo)的慢性腸炎癥起關(guān)鍵作用。這些細(xì)胞因子啟動(dòng)對(duì)強(qiáng)烈牽涉疾病進(jìn)展的致病性CD4+ T細(xì)胞的分化。相應(yīng)地，研究顯示對(duì)這些細(xì)胞的調(diào)節(jié)減輕實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎。此外，如IL-12、活化樹突狀細(xì)胞(DC)利用IL-12p40亞基分泌的IL-23也牽涉多種自身免疫疾病(包括IBD)的發(fā)展。IL-23的炎性性質(zhì)已被歸因于對(duì)Th17的誘導(dǎo)。此外，該細(xì)胞因子還激活DC中炎性細(xì)胞因子例如TNFα和IL-6的產(chǎn)生。合起來(lái)，研究顯示阻斷IL-12p40亞基信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)顯著減少炎癥，并表明IL-12和IL-23二者參與導(dǎo)致IBD的炎性級(jí)聯(lián)。與此二者細(xì)胞因子相反，IL-10對(duì)炎性信號(hào)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，從而調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子引發(fā)的免疫反應(yīng)。

益生菌(probiotic)微生物可與宿主免疫細(xì)胞相互作用，并且特定益生菌乳桿菌種類可刺激DC產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子(即IL-12)和調(diào)節(jié)性IL-10。乳桿菌是人胃腸道中的正常棲居者(inhabitant)，且為小腸中天然小型生物群的主要組分。認(rèn)為這些細(xì)菌是有益的共生物，并且一些種類和菌株由于人類消費(fèi)的歷史悠久而被普遍認(rèn)為是安全的。

本領(lǐng)域需要進(jìn)一步的方法和組合物以改進(jìn)炎性胃腸病癥例如IBD的治療。

發(fā)明簡(jiǎn)述

提供用于減少受試者炎癥的方法和組合物。所述組合物包含經(jīng)遺傳修飾以減少細(xì)胞表面上脂磷壁酸(lipoteichoic acid)展示的重組細(xì)菌。方法包括給予受試者經(jīng)修飾以減少細(xì)胞表面上脂磷壁酸展示的重組細(xì)菌。給予所述重組細(xì)菌促進(jìn)所需的治療反應(yīng)。所述重組細(xì)菌可以以單劑量或系列劑量給予。方法在治療或預(yù)防多種炎性病癥包括，例如，治療或預(yù)防炎性腸病、結(jié)腸炎或克羅恩病中得到應(yīng)用。

附圖簡(jiǎn)述

圖1 A和B顯示LTA生物合成相關(guān)通路和基因。C-D顯示使用剪接重疊延伸(SOEing)PCR擴(kuò)增和連接的靶ORF內(nèi)部區(qū)域側(cè)翼的兩個(gè)非鄰接片段(Horton, RM (1995) Mol Biotechnol. Apr;3(2):93-9)。將所得片段克隆到pORI28并轉(zhuǎn)化到包含溫度敏感型輔助質(zhì)粒pTRK669的嗜酸乳桿菌(L. acidophilus) NCK1392中。利用PCR，使用靶區(qū)域側(cè)翼的引物，針對(duì)缺失突變對(duì)ERM敏感型細(xì)胞進(jìn)行篩選，并通過(guò)對(duì)包含缺失的區(qū)域進(jìn)行測(cè)序來(lái)確認(rèn)。