[發明專利]復合低溫凍存體系冷凍雪旺細胞的方法有效
| 申請號： | 201710266580.2 | 申請日： | 2017-04-21 |
| 公開（公告）號： | CN106982820B | 公開（公告）日： | 2020-01-31 |
| 發明（設計）人： | 陳萬煜;陳熹 | 申請（專利權）人： | 武漢理工大學 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 42102 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 | 代理人： | 劉洋 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 復合 低溫 體系 冷凍 細胞 方法 | ||
【權利要求書】：
1.復合低溫凍存體系冷凍雪旺細胞的方法，其特征在于包括以下步驟：
1)將氨基酸類凝膠因子加熱溶于細胞培養基中，過濾、除菌，用含有凝膠因子的細胞培養基制備細胞懸浮液；
2)在0-4℃下形成超分子凝膠；
3)滴加含有復合冷凍保護劑的細胞培養基，待體系達到溶脹平衡；所述復合冷凍保護劑是由滲透性冷凍保護劑和非滲透性冷凍保護劑的混合；所述的滲透性冷凍保護劑為二甲基亞砜，非滲透性冷凍保護劑為海藻糖，二者終濃度分別為7.5～8.5vol％和0.045～0.055mol/L；
4)放入凍存管在程序凍存盒冷凍，再將凍存管移入液氮中凍存；
其中，所述氨基酸類凝膠因子按以下方法制備而來：
以Boc-L-酪氨酸甲酯通過烷基化反應制備得到十二烷基-Boc-L-酪氨酸甲酯；
十二烷基-Boc-L-酪氨酸甲酯通過水解反應制備得到十二烷基-Boc-L-酪氨酸，即為所述的氨基酸類凝膠因子。
2.如權利要求1所述復合低溫凍存體系冷凍雪旺細胞的方法，其特征在于所述的細胞培養基為RPMI1640培養基中加入10vol％胎牛血清和1vol％雙抗后制備成的細胞全培養基。
3.如權利要求1所述復合低溫凍存體系冷凍雪旺細胞的方法，其特征在于步驟3先滴加含有非滲透性冷凍保護劑的細胞培養基，再滴加含有滲透性冷凍保護劑的細胞培養基。
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