[發明專利]一種用于檢測ApoM啟動子基因序列的引物對及其檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201710266182.0
• 申請日: 2017-04-21
• 公開（公告）號: CN106884013A
• 公開（公告）日: 2017-06-23
• 發明（設計）人: 章堯;張普宏;高家林;孟宇;王李卓;呂俊
• 申請（專利權）人: 皖南醫學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司34107
• 代理人: 方文倩

技術領域

本發明屬于基因相關位點檢測技術領域，具體涉及一種用于檢測ApoM啟動子基因序列的引物對及其檢測方法和試劑盒。

背景技術

目前全世界糖尿病患者的數量已達3.66億，全球每7秒種就有一人死于糖尿病。糖尿病是指以血糖增高為主要臨床表現的慢性代謝性疾病，主要分為1型糖尿病和2型糖尿病，2型糖尿病占糖尿病患者90％以上。1型糖尿病是一種自體免疫疾病，是由于免疫系統對分泌胰島素的胰腺β細胞作出攻擊導致胰腺不能分泌足夠的胰島素。而2型糖尿病是由于各種致病因素導致組織器官產生胰島素抵抗，即胰島素相對缺乏，故通常臨床上用胰島素釋放實驗來區別糖尿病的類型。患者試驗空腹及進食75克葡萄糖后30分鐘、60分鐘、120分鐘和180分鐘分別抽血測定胰島素及C肽水平。若空腹胰島素及C肽低于正常，且進食后不增高考慮為1型糖尿病；若空腹胰島素及C肽低于正常、增高或降低，且進食后增高，則考慮為2型糖尿病。

2型糖尿病具體的致病原因仍然未知，現在的研究發現其是由遺傳因素和環境因素共同作用導致的，其中遺傳因素約占30％,環境因素約占70％。2型糖尿病的遺傳風險是由多個基因共同決定的，目前為止,公認的2型糖尿病易感基因已經增至20個,同時還發現了13個影響空腹血糖的基因以及5個影響餐后血糖的基因。臨床常規檢查例如空腹及餐后血糖、糖化血紅蛋白、C肽水平只能判斷2型糖尿病的發生發展情況，但無法找到致病根源，無法根據這些指標做出及時的預防和根本性的治療，而基因檢測通過對2型糖尿病相關易感基因進行檢查，能夠準確的發現致病基因，準確率達到99.9999％，真正做到快速診斷疾病，發現致病根源，提前預知2型糖尿病發病風險，可通過調節飲食結構和生活方式，有效的控制疾病的發生與發展，防止并發癥，還具有縮短檢查流程，提升檢查準確性，精確藥物用量，減少藥物毒副作用，提高藥物治療效果等一系列的優勢。對此，我們應該盡量多發現和研究一些與2型糖尿病相關的基因易感性位點，做到有病先來防，有病正確對待并及早調整和治療。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提供一種用于檢測ApoM啟動子基因序列的引物對及其檢測方法和試劑盒，該檢測方法設計巧妙、操作簡單、檢測結果可靠準確，試劑盒使用簡便可行，為后續的檢測手段以及進一步采取有針對性的健康管理、疾病預防提供參考依據。

為了實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種引物對，所述引物對是SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，所述引物對用于檢測ApoM基因啟動子區rs805396和-724兩個位點。

一種用于檢測ApoM啟動子基因序列相關位點的檢測方法，包括如下步驟：

A、提取全基因組DNA；

B、根據ApoM啟動子基因序列及位點設計引物對，對提取的全基因組DNA進行PCR擴增，回收PCR產物并割膠純化；

C、對純化后的PCR產物進行測序，并分析測序結果來判斷ApoM啟動子基因是否發生突變。

一種用于檢測ApoM啟動子基因序列的試劑盒，所述試劑盒內包括基因組DNA抽提試劑盒、PCR擴增產物純化試劑盒、PCR反應試劑盒、BigDye測序反應試劑盒、無水乙醇試劑瓶和盛放引物對的容器。

所述試劑盒內還設有控溫裝置。

所述試劑盒內設有托架，所述托架設有六個凹槽容納腔，六個凹槽容納腔內分別放置所述基因組DNA抽提試劑盒、PCR擴增產物純化試劑盒、PCR反應試劑盒、BigDye測序反應試劑盒、無水乙醇試劑瓶和盛放引物對的容器。

所述凹槽容納腔的內周向側壁設有緩沖結構。

所述試劑盒包括盒體和蓋合在盒體上的盒蓋，所述盒蓋與盒體鉸接。

所述盒體與盒蓋的蓋合處設有密封墊。