[發明專利]一種條件性基因表達調控系統

有效

• 申請號: 201710265611.2
• 申請日: 2017-04-21
• 公開（公告）號: CN107022570B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 肖丹;胡大海;蔡維霞;吳高峰;賈艷慧;黎躍華;趙彬
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85
• 代理公司: 北京挺立專利事務所(普通合伙) 11265
• 代理人: 李鑫

本發明公開了一種條件性基因表達調控系統，該系統由目標基因的表達載體和位點特異性重組酶的表達載體兩部分組成，目標基因的讀碼框中插入了內含子序列，在內含子序列中插入一個位點特異性重組酶的識別序列，在目標基因的5＇或者3＇端也插入一個位點特異性重組酶的識別序列，兩個識別序列的方向相反且兩者之間的DNA片段反向放置。本發明使得正常情況下目標基因不能表達，在位點特異性重組酶的作用下，兩個識別序列發生重組使得兩者之間的DNA片段方向發生顛倒，從而使目標基因恢復正常表達。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種條件性基因表達調控系統。

背景技術

基因的條件性表達是指在藥物或者其它基因的誘導下，實現目標基因在特定的時間或特定的空間表達，該技術在基因的功能研究以及基因治療中具有重要的意義。

目前常用的條件性基因表達調控系統有Tet on、Tet off、Cre-loxp、Flp-FRT等，然而，由于不同因素的影響，這些調控系統本底表達仍然較高。Tet on、Tet off系統依賴于藥物Dox與Tet結構域結合后使得相應的轉錄因子與啟動子結合或者脫離，從而實現誘導性表達，但由于藥物Dox不與Tet結合的情況下轉錄因子仍然與啟動子有一定程度的結合力，使得該系統本底較高。Cre-loxp和Flp-FRT原理相似，在啟動子和目標基因之間插入轉錄終止信號，轉錄終止信號兩端加入loxp序列，在CRE酶的作用下可以使啟動子和基因之間的轉錄終止信號去除，從而使目標基因啟動表達。該系統嚴謹性與Tet on、Tet off系統相比較好，但是由于轉錄終止信號并不能完全終止啟動子的啟動活性，因此該系統也存在一定的本底表達。

綜上，目前仍沒有一種足夠嚴謹的條件性基因表達調控系統。

發明內容

針對上述基因表達調控嚴謹性不足存在的技術難題，本發明的目的在于，提供一種嚴謹性較高的條件性基因表達調控系統。本發明將目標基因分為兩個段，將其中一段的方向跌倒，這樣破壞了目標基因的正常編碼順序，使得正常情況下目標基因完全不能表達，而在位點特異性重組酶的作用下跌倒的片段恢復為正常方向后，目標基因的讀碼框恢復正常，基因才能正常表達。

為了實現上述任務，本發明采取如下的技術解決方案：

一種條件性基因表達調控系統，其特征在于，該系統由目標基因的表達載體和位點特異性重組酶的表達載體兩部分組成，目標基因的讀碼框中插入了內含子序列，在內含子序列中插入一個位點特異性重組酶的識別序列，在目標基因的5＇或者3＇端也插入一個位點特異性重組酶的識別序列，兩個識別序列的方向相反且兩者之間的DNA片段反向放置。

所述目標基因的讀碼框中插入了內含子序列是指目標基因起始密碼子和終止密碼子之間的任意兩個相鄰堿基之間插入了內含子序列；所述在內含子序列中是指在內含子的剪切供體序列和剪切受體序列之間。

所述表達載體是真核表達載體。

所述位點特異性重組酶是CRE、FLP、ΦC31中的任意一種；所述位點特異性重組酶的識別序列是CRE酶識別的loxp序列、FLP酶識別的FRT序列、ΦC31酶識別的attB/attP中的任意一種。

所述內含子序列為SEQ ID No.1的內含子序列1，如下：

SEQ ID No.1：內含子序列1

GTAAGTATCAAGGTTACAAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCTCGAGTACAGAATTCATGATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAG。

所述內含子序列為SEQ ID No.11的內含子序列2，如下：

SEQ ID No.11：內含子序列2