[發明專利]一種腫瘤浸潤T淋巴細胞的分離誘導方法有效
| 申請號： | 201710264413.4 | 申請日： | 2017-04-21 |
| 公開（公告）號： | CN107043749B | 公開（公告）日： | 2019-11-01 |
| 發明（設計）人： | 盧戌;王燕飛;梁孟儒;劉靜維;劉雪松;王躍;黃彩庭;李京坡;吳璇 | 申請（專利權）人： | 北京奧康華醫學檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;張立娜 |
| 地址： | 101300 北京市順義區裕*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 腫瘤浸潤 誘導培養液 腫瘤組織塊 培養孔 腫瘤細胞殺傷 完全培養基 半量換液 實體腫瘤 誘導培養 去除 誘導 細胞 | ||
1.一種從實體腫瘤中分離誘導培養腫瘤浸潤T淋巴細胞的方法，包括如下步驟：
(1)將大小2～3mm3的腫瘤組織塊加入含有分離誘導培養液的培養孔中進行培養；
所述分離誘導培養液為僅額外添加IL-7和IL-15的RPMI-1640完全培養基；
(2)每3～4天進行一次半量換液；
(3)2～3周后，去除所述腫瘤組織塊，培養孔中的細胞即為腫瘤浸潤T淋巴細胞；
所述分離誘導培養液中IL-7的終濃度為2～5U/ml，IL-15的終濃度為2～5U/ml。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，加入到含有所述分離誘導培養液的培養孔中進行培養的所述大小2～3mm3的腫瘤組織塊取自實體腫瘤不同部位，取材范圍從腫瘤中心至腫瘤交界區域，距腫瘤邊緣內1.5mm處。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，是24孔培養板中每個培養孔中加入一個所述腫瘤組織塊，用2mL所述分離誘導培養液進行培養。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)中，去除所述腫瘤組織塊后還包括如下步驟：待所述培養孔中的細胞長至匯合度100％時，測定每個培養孔中細胞的抑瘤活性，將所述抑瘤活性相對較強的孔中的細胞混合，即得腫瘤浸潤T淋巴細胞。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述抑瘤活性體現為對靶細胞的殺傷活性；所述靶細胞為腫瘤細胞。
6.一種用于從實體腫瘤中分離誘導培養腫瘤浸潤T淋巴細胞的分離誘導培養液，為僅額外添加IL-7和IL-15的RPMI-1640完全培養基；
所述分離誘導培養液中IL-7的終濃度為2～5U/ml，IL-15的終濃度為2～5U/ml。
7.權利要求6所述的分離誘導培養液在用于在體外從實體腫瘤中分離誘導培養腫瘤浸潤T淋巴細胞中的應用。
8.一種用于從實體腫瘤中分離誘導培養腫瘤浸潤T淋巴細胞的試劑盒，含有權利要求6所述的分離誘導培養液以及記載有權利要求1-5中任一所述方法的可讀性載體。
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