[發明專利]一種落葉松植物離體發生的方法

有效

• 申請號: 201710263530.9
• 申請日: 2017-04-21
• 公開（公告）號: CN106879473B
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發明（設計）人: 朱木蘭;衛志明;鄭武林;劉航
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 王正君;馬莉華

1.一種落葉松植物的繁殖方法，其特征在于，包括步驟：

(a)對所述落葉松植物的種子進行萌發處理，從而獲得經萌發的種苗；

(b)對所述經萌發的種苗培養n天，其中n為4-20，從而獲得經培養的實生苗；

(c)對所述實生苗的下胚軸進行切取，獲得下胚軸切段，所述下胚軸切段的長度為1-6mm；和

(d)對所述的下胚軸切段進行再生，從而獲得落葉松植物植株；

在步驟(d)中，包括以下一個或多個獨立的子步驟：

(d1)對所述的下胚軸切段進行培養，獲得愈傷組織；

(d2)將所述愈傷組織置于含0.05-10mg/l BA和0.01-5mg/l NAA的低氮和/或低NH₄⁺培養基上，于23±1℃培養8-12周，獲得原始不定芽，即芽原基；

(d3)將所述帶有原始不定芽的愈傷組織置于含0.05-10mg/l BA，0-0.1mg/l TDZ和0.01-5mg/lNAA的低氮和/或低NH₄⁺培養基上培養6-8周，于23±1℃培養，誘導出形態清晰的不定芽；將所述清晰的不定芽置于含0-6mg/l BA、0-0.6mg/l NAA和0-6mg/l GA₃的低氮和/或低NH₄⁺培養基上，于23±1℃培養，4-6周后，得到伸長的不定芽；

(d4)將所述伸長不定芽置于含有0-6mg/l BA、0-0.6mg/l NAA和0-6mg/lGA₃的低氮和/或低NH₄⁺培養基上，于22±1℃進行暗培養2-8天；將所述暗培養后的不定芽，去除形態學下端葉片，用5-100mg/l IBA預處理0.2-36h；所述預處理后的不定芽，切除形態學下端莖段，在含0.01-5mg/l IBA的1/2MS培養基中繼續培養；所述低氮和/或低NH₄⁺的培養基基于MS培養基的配方，對KNO₃、NH₄NO₃、NH₄Cl、和Ca(NO₃)₂·2H₂O的含量進行調整，其他成分不作調整；

所述的“低氮”指所述培養基或培養條件的氮含量N_L與MS培養基中氮含量N0之比為0.35-0.8；

所述的“低NH₄⁺”指所述培養基或培養條件的NH₄⁺含量M_L與MS培養基中NH₄⁺含量M0之比為0.2-0.7。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(d4)中，在1/2MS培養基中繼續培養4-6周，于24±1℃培養誘導得到不定根。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(c)中，所述下胚軸切段的長度為1-5mm。