[發明專利]一種檢測生物體內和環境中惡唑酰草胺光學異構體含量的方法

有效

• 申請號: 201710262964.7
• 申請日: 2017-04-20
• 公開（公告）號: CN107102076B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 陳福欣;陳蘇英;加曉丹;侯彬彬;李侃社;龔頻
• 申請（專利權）人: 西安科技大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/89;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/06
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明提供一種檢測生物體內和環境中惡唑酰草胺光學異構體含量的方法，具體步驟包括：1)樣品的準備；2)確定手性色譜分離條件；3)確定質譜條件；4)光學異構體含量測定。本發明選擇手性高效液相色譜?質譜/質譜技術定量檢測體內/環境中惡唑酰草胺光學異構體含量，具有操作簡單，定量準確、批量成本低，特別適用于農殘檢測/監測的需要，為體內/環境中惡唑酰草胺光學異構體的檢測提供了一條新的思路和方法。

技術領域

本發明涉及一種基于手性高效液相色譜-質譜/質譜技術檢測和監測生物或環境樣品中(R)-惡唑酰草胺和(S)-惡唑酰草胺光學異構體含量的方法，屬于農藥分析和農殘檢測/監測領域。

背景技術

據統計，至2015年，世界上農藥有25％是手性分子，絕大多數以外消旋體形式出售和使用，而單一異構體只占7％。由于酶、蛋白質、離子通道等受體的不對稱環境，手性農藥與受體的結合具有立體選擇性；其被生物吸收后，代謝、轉化、排泄等過程往往也是選擇性的。在多數情況下，對映體中的一種異構體對目標生物體具有殺蟲或殺菌活性，或者對非目標生物體毒性較大，而另一種卻不具備藥效或藥效很低。因此通過非手性分析得到的外消旋農藥的總濃度所指示的可能與實際生態毒理學效應并不相符。只有在對映異構體水平上研究手性農藥的毒性問題、環境問題，才能準確評價人體健康和生態系統的風險性。

惡唑酰草胺(Metamifop,CAS:256412-89-2)是芳氧苯氧丙酸酯類除草劑，屬ACC酶抑制劑。該藥物有一個手性中心，兩個光學異構體，即(R)-惡唑酰草胺和(S)-惡唑酰草胺，現有的毒理、環境影響和生物體內代謝研究，都沒有涉及到惡唑酰草胺的手性中心。介于“海豹嬰兒”事件的影響，深入和細致的研究手性化合物不同異構體在生物體內的不同是非常必要和必須的；同時環境因素也有可能導致光學異構體之間的轉化，產生新的農藥污染問題。

HPLC-PDA或HPLC-MS等方法常用于惡唑酰草胺環境中濃度檢測，但該方法只能檢測惡唑酰草胺光學異構體的總濃度，無法分別檢測(R)和(S)-惡唑酰草胺。而上個世紀的“海豹嬰兒”悲劇，使得人們逐漸認識到，無論是手性藥物還是農藥，其不同對映異構體在生物體內的差異是非常巨大。因此，同時建立(R)和(S)-惡唑酰草胺生物和環境中藥物濃度的分析方法是非常必要的。

反相手性高效液相色譜-質譜/質譜技術結合了手性色譜柱對光學異構體的分離能力和質譜/質譜技術的高靈敏度，可以較好的解決手性藥物的光學異構體的檢測問題。然而，針對不同的分離對象，需要對進樣量、柱溫、洗脫劑(即流動相)、流速、母離子/子離子選擇、碰撞能量、錐孔電壓等大量條件和參數進行優化和篩選，既要保證光學異構體的分離，還要達到生物或環境體內微量或痕量藥物的檢測，難度極大。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測生物體內和環境中惡唑酰草胺光學異構體含量的方法，特別適合在手性農藥惡唑酰草胺的生物體內殘留或環境殘留的檢測/監測中應用。

為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：

1)樣品的準備：將生物樣品或生物樣品的勻漿液與乙腈混合以沉淀蛋白，通過離心分離沉淀，將離心所得上清液吹干，得到待分析樣品；或用乙腈直接提取環境樣品中的惡唑酰草胺后離心,將離心所得上清液吹干，得到待分析樣品；

2)確定手性色譜分離條件：根據(R)-惡唑酰草胺和(S)-惡唑酰草胺的分離度≥1.5的要求，手性高效液相色譜分離中采用的流動相為甲醇或乙腈與水、易揮發性緩沖鹽以及易揮發性酸的混合溶液，混合溶液中所述緩沖鹽的濃度為1-10mM，所述酸的體積分數為0.01-0.5％，甲醇或乙腈與水的體積比為1～9:1；柱溫為5-50℃；進樣量為1-10μL；流動相流速為0.3-0.8mL/min，等度洗脫；

3)確定質譜/質譜工作條件：采用三重四級桿質譜以及多反應監測掃描模式；母離子和子離子分別為441.09和318.05；錐孔電壓為20-35V；碰撞能量為15-40eV；