[發(fā)明專利]一種ASE?HPLC法測(cè)定黃芩中黃芩苷含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710259567.4
• 申請(qǐng)日: 2017-04-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106950318A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖強(qiáng);陳學(xué)松;韋日偉;王麗麗;歐妮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙)44295
• 代理人: 蔡國(guó)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，尤其是一種ASE-HPLC法測(cè)定黃芩中黃芩苷含量的方法。

背景技術(shù)

2010年版藥典方法中記載的制備供試品溶液的方法為：取本品中粉約0.3g，精密稱定，加70％乙醇40ml，加熱回流3小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V人同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

該方法回流時(shí)間長(zhǎng)，且對(duì)技術(shù)人員的專業(yè)水平要求較高。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述不足，本發(fā)明旨在提供一種ASE-HPLC法測(cè)定黃芩中黃芩苷含量的方法，該方法提取效果好且耗時(shí)短、重復(fù)性好，檢測(cè)精度高。

為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)效果，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種ASE-HPLC法測(cè)定黃芩中黃芩苷含量的方法，依次包括下述步驟：

步驟1：采用ASE法萃取黃芩粉末，并收集乙醇萃取液；

步驟2：采用HPLC法測(cè)定乙醇萃取液中黃芩苷的含量。

優(yōu)選地，所述的步驟1依次包括下述子步驟：

步驟S1：將黃芩樣品粉碎，過(guò)篩，取0.3g與1g石英砂混合；

步驟S2：將所得的混合物裝于放有濾膜的ASE萃取池中，加石英砂至與池口平行；

步驟S3：用70％乙醇萃取，結(jié)束后，將萃取液用70％乙醇定容至50ml，離心，取上清液，即得。

優(yōu)選地，步驟S3所述的萃取參數(shù)為：壓力為1500psi，溫度為120℃，萃取時(shí)間為5min，循環(huán)次數(shù)為3次，沖洗體積為100％，吹掃時(shí)間為100s。

優(yōu)選地，步驟S2所述的ASE萃取池的體積為10ml。

優(yōu)選地，步驟S3所述的離心參數(shù)為：離心速度為15000r/min，離心時(shí)間為3min。

優(yōu)選地，步驟1所述的HPLC法的檢測(cè)參數(shù)為：色譜柱為T(mén)hermo Syncronis C18；柱溫為40℃；流速為0.5mL/min；流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。

優(yōu)選地，所述的色譜柱規(guī)格為：3*100mm，3μm。

優(yōu)選地，所述的流動(dòng)相為體積比等于47：53的甲醇-0.1％磷酸。

本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明曾對(duì)快速溶劑萃取使用的溶劑進(jìn)行考察，《中國(guó)藥典》使用70％乙醇回流3小時(shí)。本實(shí)驗(yàn)選用甲醇、乙醇、70％乙醇作為提取溶劑進(jìn)行了溶劑考察，結(jié)果顯示甲醇與乙醇提取后黃芩苷含量與2015年版《中國(guó)藥典》含量下降，原因可能是黃芩苷的極性大，故采用與藥典一致的提取溶劑70％乙醇。

70％乙醇的熔沸點(diǎn)較高，快速溶劑萃取(以下簡(jiǎn)稱ASE)提取原理：A:提高溫度降低溶劑的黏度，減少溶劑進(jìn)入樣品基體的阻止，增加了溶劑進(jìn)入樣品基體的擴(kuò)散，降低溶劑和樣品基體之間的表面張力，使溶劑溶解待測(cè)物的容量增加；B:萃取液體的沸點(diǎn)隨壓力升高而提高，從而使溶劑在高溫高壓下仍保持在液態(tài)(液體對(duì)溶質(zhì)的溶解能力遠(yuǎn)大于氣體對(duì)溶質(zhì)的溶解能力)。故我們選擇采用120℃，提取5min，提取3次，即可達(dá)到與藥典含量接近，更多的提取時(shí)間、溫度、次數(shù)對(duì)結(jié)果已經(jīng)無(wú)明顯影響。最終確定最佳提取工藝組合為提取溫度120℃，提取時(shí)間5min，提取次數(shù)3次。

附圖說(shuō)明

圖1為以黃芩苷對(duì)照品的濃度(mg/ml)-峰面積進(jìn)行的線性回歸圖；

圖2為黃芩苷對(duì)照品的色譜圖；

圖3為采用藥典方法提取所得的供試品溶液的色譜圖；

圖4為采用ASE法萃取所得的供試品溶液的色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)所做的有限次修改，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)。

實(shí)施例1

1、儀器設(shè)備及試劑

1.1儀器：

電子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶劑萃取儀(美國(guó)DIONEX公司)、Thermo U3000 UHPLC液相色譜儀。

1.2試劑：

水：符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水；

乙醇(CH₄O)：色譜純(液相色譜用)；

石英砂：粒徑2mm。

2、方法

2.1供試品溶液的制備

2.1.1 2010年版藥典方法：