[發明專利]一種地龍蛋白的提取方法有效
| 申請號： | 201710255679.2 | 申請日： | 2017-04-19 |
| 公開（公告）號： | CN107056881B | 公開（公告）日： | 2020-07-28 |
| 發明（設計）人： | 鞏東輝;格日樂 | 申請（專利權）人： | 北京恒大博醫中醫研究院 |
| 主分類號： | C07K1/14 | 分類號： | C07K1/14;C07K1/18;C07K1/30 |
| 代理公司： | 北京正理專利代理有限公司 11257 | 代理人： | 趙曉丹 |
| 地址： | 100083 北京市海淀*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 地龍 蛋白 提取 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種地龍蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)取活體地龍，除雜，用液氮處理后進行粉碎；
2)加入3-4倍體積的無水乙醇，0-4℃浸泡16-24h，離心，去除上清；
3)加入濃度為0.05％-0.10％的高氯酸溶液，調節pH值到3.5-4.5，15-20℃浸提20-30min，離心，抽取上清；
4)加入活性炭，攪拌并靜置，離心，抽取上清；所述活性炭的添加量為50-100mg/mL，靜置5-10min；
5)用磷酸緩沖液調節上清液pH值至5-6，加入硫酸鈉粉末，處理10-15min，沉淀，得到地龍蛋白粗提物；所述加入硫酸鈉粉末后使得硫酸鈉的飽和度為40-55％；
6)將地龍蛋白粗提物用pH7.2 20mM Tris-HCl緩沖液溶解，與DEAE-Sephadex離子交換介質接觸，依次用含有0、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8M的NaCl的pH8.4 20mM Tris-HCl緩沖液洗脫，收集0.6M的洗脫成分，洗脫成分經透析、濃縮、凍干，即得。
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于：步驟2)、3)、4)中所述的離心均為以8000-12000r/min的轉速離心3-8min。
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