[發明專利]一種蘆筍根際土壤中有機酸的提取方法

有效

• 申請號: 201710255036.8
• 申請日: 2017-04-19
• 公開（公告）號: CN107422049B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 尹玉玲;謝啟鑫;陳光宇;周勁松;羅紹春;湯泳萍;張岳平
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/12
• 代理公司: 南昌大牛專利代理事務所(普通合伙) 36135
• 代理人: 喻莎

1.一種蘆筍根際土壤中有機酸的提取方法，其特征在于包括以下步驟：

1)在250mL三角瓶中，將30g蘆筍根際土壤與100mL超純水混合，密封瓶口，置搖床上振蕩2h，而后用兩層定性濾紙過濾，取濾液待用；

2)將步驟1)所得濾液以0.6mL/min的流速依次通過陽離子交換樹脂柱、陰離子交換樹脂柱，然后再將滯留在陰離子交換柱內的有機酸組分用1mol/L的HCl溶液洗脫，洗脫時的過柱流速為0.5mL/min；

3)取洗脫液用旋轉蒸發儀以35℃的溫度、80～90r/min的轉速濃縮去除液相組分，用超純水洗出殘留物并定容至10mL，利用0.22μm孔徑的水系濾膜過濾，取濾液即為產物；

其中，陽離子交換樹脂柱和陰離子交換樹脂柱的長度均為80cm、直徑均為2.4cm、內裝樹脂質量均為300g；

步驟1)所述根際土壤是通過以下方法獲得的：將栽培兩個月的蘆筍苗連根帶土整體從缽中取出，去除根系外圍土壤，而后將根系附著的土壤抖落，被抖落的土壤即為所述根際土壤；

所述陽離子交換樹脂柱中的陽離子交換樹脂，在使用前是通過以下步驟進行預處理的：用清水浸泡樹脂24小時，再用清水沖洗樹脂直至洗出液無雜質，去除液相組分，而后用樹脂質量3倍、濃度為1M的鹽酸溶液與樹脂混合，攪拌2h，去除液相組分，加入60～70℃的水洗滌至中性；

所述陰離子交換樹脂柱中的陰離子交換樹脂，在使用前是通過以下步驟進行預處理的：用清水浸泡樹脂24小時，再用清水沖洗樹脂直至洗出液無雜質，去除液相組分，而后用樹脂質量3倍、濃度為1M的氫氧化鈉溶液與之混合，攪拌2h，去除液相組分，加入60～70℃的水洗滌至中性。

2.根據權利要求1所述的一種蘆筍根際土壤中有機酸的提取方法，其特征在于步驟1)所述密封是利用塑料薄膜封住瓶口。

3.根據權利要求1所述的一種蘆筍根際土壤中有機酸的提取方法，其特征在于步驟1)所得的濾液在執行步驟2)之前保存于無菌試劑瓶中。

4.根據權利要求1所述的一種蘆筍根際土壤中有機酸的提取方法，其特征在于還包括以下步驟4)：利用HPLC檢測步驟3)所得濾液中有機酸類別和含量。

5.根據權利要求1所述的一種蘆筍根際土壤中有機酸的提取方法，其特征在于所述蘆筍苗的品種是井岡701或井岡紅。

6.根據權利要求1所述的一種蘆筍根際土壤中有機酸的提取方法，其特征在于獲得根際土壤后在5min之內執行步驟1)。

7.根據權利要求1所述的一種蘆筍根際土壤中有機酸的提取方法，其特征在于蘆筍是通過以下方法栽培的：

A)催芽：取蘆筍種子浸泡于次氯酸鈉溶液中，攪拌，5分鐘后用清水洗凈；

B)浸種：在25～30℃溫水中浸泡36～48h，每天換水2～3次；

C)將步驟B)浸種后的種子洗凈，在培養皿中置于濕潤濾紙的表面上，于25～30℃環境下催芽48～72h，每天清水沖洗1～2次；

D)將萌發的種子播入營養缽中，土與基質比例為3:1。