[發明專利]一種A型賽尼卡谷病毒樣顆粒疫苗及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201710253478.9
• 申請日: 2017-04-18
• 公開（公告）號: CN107184968B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 田波;呂宏亮;董金杰;劉萍;陳苗苗;鄧瑞雪;張濤;王會寶;王凡;劉西蘭;景志忠;高世杰;王超英;張云德;殷宏;張永光
• 申請（專利權）人: 中農威特生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K39/39;C12N15/86;C12N15/41;C12N7/04;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種A型塞尼卡谷病毒樣顆粒疫苗及其制備方法和用途。本發明疫苗的有效成分為A型塞尼卡谷病毒樣顆粒，所述A型塞尼卡谷病毒樣顆粒是由A型塞尼卡谷病毒P1?P2?P3的基因序列通過桿狀病毒表達系統表達、組裝、純化后得到，其中，所述的A型塞尼卡谷病毒P1?P2?P3的基因序列如SEQ ID NO.1所示。此外，本發明還提出了一種制備所述疫苗的高產方法，本發明利用桿狀病毒級聯反應基因調節元件構建桿狀病毒載體的表達盒，采用適應高pH條件下無血清培養的昆蟲細胞作為宿主細胞，使得重組桿狀病毒表達SVA P1?P2?P3形成的VLPs的產量顯著提高，顯著增強了SVA VLPs生產效率。

技術領域

本發明涉及一種A型賽尼卡谷病毒樣顆粒疫苗及其制備方法，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

A型塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus A，SVA)屬于小RNA病毒科賽尼卡谷病毒屬，病毒基因組為單股正鏈RNA，約由7800個核苷酸組成。在美洲、中國引起豬的水皰病和仔豬死亡。設計SVA病毒樣顆粒疫苗以應對SVA疾病的血清學檢驗和防控至關重要。

病毒樣顆粒疫苗保持了病毒滅活疫苗的良好免疫原性，并且具有高度安全性，可區別感染和免疫(DIVA)，其生產過程中避免使了用活的病毒，可以通過無血清懸浮培養。

桿狀病毒表達質粒系統(Baculovirus expression vector system，BEVS)是高效抗原制備技術之一。使用桿狀病毒表達盒在昆蟲細胞生產病毒樣顆粒抗原。表達盒產出病毒樣顆粒抗原量高出300％倍，VLPs在大小、形態、功能上一致。表達盒的簡單修飾改造顯著改善VLP-為基礎疫苗造價/效率，有助于塞尼卡谷病毒樣顆粒疫苗商業競爭和廣泛使用。

桿狀病毒載體用于重組蛋白和疫苗抗原生產，普遍采用自養性加利福尼亞多核多角體病毒(Autographa californica multinuclear polyhedrosis virus，AcMNPV)。自桿狀病毒表達載體系統(baculovirus expression vector system，BEVS)在80年代開發成功以來，許多重組蛋白，從細胞內酶到膜結合蛋白已在桿狀病毒感染的昆蟲細胞成功表達。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種A型賽尼卡谷病毒樣顆粒疫苗及其高產方法，為達到上述目的，本發明提供了含新型表達盒的重組桿狀病毒，提供了無血清懸浮培養馴化昆蟲細胞SFHi5pH，提供了提供穩定、高效、質量可控生產A型賽尼卡谷病毒顆粒的方法，同時提供了生產A型賽尼卡谷病毒顆粒疫苗的檢驗和評估方法。

具體的，本發明采用了以下技術手段：

本發明的一種A型塞尼卡谷病毒樣顆粒疫苗，其有效成分為A型塞尼卡谷病毒樣顆粒，所述的A型塞尼卡谷病毒樣顆粒是由A型塞尼卡谷病毒P1-P2-P3的基因序列通過桿狀病毒表達系統表達、組裝、純化后得到，其中，所述的A型塞尼卡谷病毒P1-P2-P3的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步的，本發明還提供了一種制備所述的A型塞尼卡谷病毒樣顆粒疫苗的常規方法以及一種在常規方法基礎上通過改進后的高產方法：

一種制備所述的A型塞尼卡谷病毒樣顆粒疫苗的常規方法，包括以下步驟：

(1)將A型塞尼卡谷病毒P1-P2-P3的基因序列插入昆蟲桿狀病毒pFastBac1或pFastBac-Dual載體中，經酶切鑒定及測序，篩選出陽性重組載體，并轉化含有桿狀病毒穿梭載體的DH10Bac感受態細胞，獲得重組桿狀病毒穿梭載體rBacmid；

(2)將含A型塞尼卡谷病毒P1-P2-P3的基因序列的重組桿狀病毒穿梭載體rBacmid轉染入宿主昆蟲細胞株Hi5中，獲得重組昆蟲桿狀病毒，命名為AcMNPV-SVA-P1-P2-P3；