[發明專利]人JAK2V617F基因突變檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710251443.1
• 申請日: 2017-04-18
• 公開（公告）號: CN106906299A
• 公開（公告）日: 2017-06-30
• 發明（設計）人: 邢述;趙志壯;付學奇;王銳;張雯雯;宋淮宇;吳琦;李雪;吳傳旭;王華
• 申請（專利權）人: 吉林省銳吉爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所43205
• 代理人: 寧星耀

1.人JAK2V617F基因突變檢測試劑盒，其特征在于，包括A盒和B盒，A盒包括磁珠BC、裂解液BL、洗滌液BW1和洗脫液CE；B盒包括預混液Ⅰ、預混液Ⅱ、陽性標準品、陰性標準品、超純水、15mg/mL的蛋白酶K溶液、DNA Loading Buffer和DNA Marker。

2.根據權利要求1所述的人JAK2V617F基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述預混液Ⅰ制備步驟包括：將20μM的JAK3引物(SEQ ID NO.2所示)和20μM的JAK4引物(SEQ ID NO.3所示)等體積混合，然后將混合引物與2×Taq PCR MIX Loading Dye-free按體積比2:55的比例混勻即得。

3.根據權利要求1所述的人JAK2V617F基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述預混液Ⅱ制備步驟包括：按照終濃度為5μM J2f引物(SEQ ID NO.4所示)、5μM J2r引物(SEQ ID NO.5所示)、10μM J2nf引物(SEQ ID NO.6所示)和40μM J2mr引物(SEQ ID NO.1所示)的量配制巢式PCR引物，然后將巢式PCR引物與2×Taq PCR MIX Loading Dye-free按體積比2:55的比例配制，混勻即得。

4.根據權利要求1所述的人JAK2V617F基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液為將蛋白酶K溶解于Tris-HCl、CaCl₂和甘油三者的混合溶液中獲得；所述Tris-HCl濃度為10mM，pH值7.5，CaCl₂濃度為20mM，甘油質量分數為50％。

5.根據權利要求1所述的人JAK2V617F基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述陰性標準品制備步驟包括：將pKS-JAK2質粒1μL加入到100μL E.coli DH5α感受態細胞溶液中，混合均勻，42℃水浴熱激90s，冰浴冷卻至0℃，加入800μL LB液體培養基，37℃輕微振蕩復蘇1h，取100μL培養物涂含100μg/mL Amp的LB固體平板，37℃培養12～14小時；挑單菌落振蕩過夜培養，提取質粒DNA，用超純水將質粒DNA稀釋到10ng/μL，即為陰性標準品。

6.根據權利要求1所述的人JAK2V617F基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性標準品的制備步驟包括：將pKS-JAK2V617F質粒1μL加入到100μL E.coli DH5α感受態細胞溶液中，混合均勻，42℃水浴熱激90s，冰浴冷卻至0℃，加入800μL LB液體培養基，37℃輕微振蕩復蘇1h，取100μl培養物涂含100μg/mL Amp的LB固體平板，37℃培養12～14小時；挑單菌落振蕩過夜培養，提取質粒，用超純水將質粒DNA稀釋到10ng/μL，并按1：9的體積比與陰性標準品混合均勻即得陽性標準品。

7.根據權利要求1所述的人JAK2V617F基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中各樣品的量為：