[發(fā)明專利]基于psbA-trnH序列分析結(jié)合重要表型性狀選擇的白及雜種優(yōu)勢預(yù)測方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710250402.0
• 申請日: 2017-04-17
• 公開（公告）號: CN107043819B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁泉;董文漢;尹元萍;張雅瓊;王明君;黃莉;楊生超;張慧;何潘敏
• 申請（專利權(quán)）人: 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 云南凌云律師事務(wù)所 53207
• 代理人: 董建國

1.一種基于psbA-trnH序列分析結(jié)合重要表型形狀選擇的白及雜種優(yōu)勢預(yù)測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）按照原生境來源劃分白及種質(zhì)資源材料；

（2）根據(jù)3年生白及種質(zhì)資源假鱗莖直徑、假鱗莖指狀分枝的長/寬比、假鱗莖厚度、倒數(shù)第一和第二片葉片之間的夾角、倒數(shù)第二葉葉片中部寬度重要表型性狀劃分類別；

（3）從白及種質(zhì)資源材料葉片中分離提取DNA；

（4）以DNA為模板，psbA-trnH分子標(biāo)記為引物，通過PCR擴(kuò)增出特異片段；

（5）凝膠電泳檢測并回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并雙向測序，峰圖經(jīng)專業(yè)軟件拼接后去除引物及低質(zhì)量區(qū)，獲得相應(yīng)DNA條形碼序列；

（6）DNA條形碼序列在ncbigenbank數(shù)據(jù)庫上與公布的標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對，確定其基原植物是否符合白及的標(biāo)準(zhǔn)；

（7）采用MEGA計(jì)算序列間的遺傳距離，采用羅杰斯距離（RD）或改良的羅杰斯距離（MRD）來確定相關(guān)種質(zhì)的親緣關(guān)系；

（8）以親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近為基本指標(biāo)，結(jié)合上述重要表型性狀確定雙親；

（9）以重要表型性狀突出的親本為母本，經(jīng)人工去雄授粉，得到雜種F1代蒴果；

（10）成熟的雜種蒴果采收，經(jīng)組培快繁或者進(jìn)行種子直播育苗得到F1代雜種種苗。

2.根據(jù)權(quán)利權(quán)利要求1所述的一種基于psbA-trnH序列分析結(jié)合重要表型形狀選擇的白及雜種優(yōu)勢預(yù)測方法，其特征在于，所述psbA-trnH分子標(biāo)記引物的上、下游序列分別為

5'-GTTATGCATGAACGTAATGCTC3'，

5'- CGCGCATGGTGGATTCACAATCC 3'。

3.一種如權(quán)利要求1所述的基于psbA-trnH序列分析的白及雜種優(yōu)勢預(yù)測方法在白及生產(chǎn)上的應(yīng)用。