[發明專利]一種能適應高固液比體系的鎘污染土壤治理復合菌劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201710249541.1
• 申請日: 2017-04-17
• 公開（公告）號: CN107189957B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 劉學端;柏連陽;劉宏偉;蔣慧丹;郝曉東
• 申請（專利權）人: 中南大學;湖南省農業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C09K17/14;C12R1/01;C12R1/72;C12R1/02;C12R1/645;C12R1/385
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

1.一種能適應高固液比體系的鎘污染土壤治理復合菌劑的制備方法，其特征在于，所述的復合菌劑由隱性嗜酸桿菌(Acidiphilium cryptum)、皺褶假絲酵母菌(Candidarugosa)、固氮醋酸桿菌(Acetobacter diazotrophicus)、粘紅酵母菌(Rhodotorulaglutinis)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜酸氧化硫硫桿菌(Acidithiobacillus thiooxidans)和嗜酸氧化亞鐵硫桿菌(Acidthiobacillusferrooxidans)混合組成；

先將各種微生物單獨培養，當達到對數生長期時離心收菌并計數，根據微生物數量比例混合獲得兩種復合群落，其中隱性嗜酸桿菌、皺褶假絲酵母菌、固氮醋酸桿菌、粘紅酵母菌和銅綠假單胞菌按照1～1.5：1～1.5：1～1.5：1～1.5：1～1.5的比例混合得 到復合群落a；嗜酸氧化硫硫桿菌和嗜酸氧化亞鐵硫桿菌按照1.1～1.5：1.2～1.5的比例混合得到復合群落b；將得到的復合群落a和b按照菌濃數量比1:1混合得到復合群落c，最后再培養得到復合菌劑。

2.根據權利要求1所述的一種能適應高固液比體系的鎘污染土壤治理復合菌劑的制備方法，其特征在于，各微生物單獨培養的培養基成分為：(NH₄)₂SO₄，0.3g/L；KCl，0.01g/L；K₂HPO₄，0.05g/L；MgSO₄·7H₂O，0.05g/L和Ca(NO₃)₂，0.001g/L；單獨培養隱性嗜酸桿菌、皺褶假絲酵母菌、固氮醋酸桿菌、粘紅酵母菌和銅綠假單胞菌時，培養基中加入葡萄糖0.5～1g/L，酵母粉0.05～0.1g/L；單獨培養嗜酸氧化硫硫桿菌和嗜酸氧化亞鐵硫桿菌時，在培養基中加入硫粉0.5～1g/L，硫酸亞鐵2.50～4.47g/L。

3.根據權利要求1所述的一種能適應高固液比體系的鎘污染土壤治理復合菌劑的制備方法，其特征在于，將得到的復合群落a和b分別在含鎘培養基中進行馴化；然后將復合群落a和b混合得到復合群落c，最后在高固液比體系的鎘污染土壤環境下進行適應性培養得到復合菌劑。

4.根據權利要求3所述的一種能適應高固液比體系的鎘污染土壤治理復合菌劑的制備方法，其特征在于，將得到的復合群落a和b分別在馴化培養基中進行馴化，馴化培養基成分為：(NH₄)₂SO₄，0.3g/L；KCl，0.01g/L；K₂HPO₄，0.05g/L；MgSO₄·7H₂O，0.05g/L和Ca(NO₃)₂，0.001g/L；培養復合群落a時，在培養基中加入葡萄糖0.5～1g/L，酵母粉0.05～0.1g/L；培養復合群落b時在培養基中加入硫粉0.5～1g/L，硫酸亞鐵2.50～4.47g/L；此外，在培養基中均加入-20目的5-10wt％鎘污染土樣，土壤中鎘含量范圍為10～30mg/kg；每次傳代接種的微生物濃度為1-4×10⁷個/mL，培養后微生物的濃度至少達到4×10⁸-10⁹個/mL；復合群落a和b各自培養5-8代后，按照菌濃度等比例混合得到復合群落c。

5.根據權利要3所述的一種能適應高固液比體系的鎘污染土壤治理復合菌劑的制備方法，其特征在于，復合群落a和b的馴化過程在200-250mL的錐形瓶中進行，恒溫培養箱轉速為170-175rpm，培養溫度為25-30℃，初始pH值為2.5-3.0。