[發明專利]產3-羥基丙酸的重組菌及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710247568.7
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN108728471B
• 公開（公告）日: 2020-01-31
• 發明（設計）人: 劉偉豐;劉波;崔倩倩;趙廣;陶勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/21;C12P7/42;C12R1/19
• 代理公司: 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.重組菌的構建方法，包括對受體菌進行乙的改造，得到所述重組菌；所述乙為A1、A2、A3、A4、A5和A6；

A1、敲除所述受體菌的脂肪酸降解轉錄因子fadR基因或抑制所述fadR基因的表達或抑制所述fadR基因編碼的蛋白質的活性；

A2、敲除所述受體菌的β-酮脂酰-ACP合酶II基因fabF基因或抑制所述fabF基因的表達或抑制所述fabF基因編碼的蛋白質的活性；

A3、敲除所述受體菌的β-酮脂酰-ACP合酶III基因fabH基因或抑制所述fabH基因的表達或抑制所述fabH基因編碼的蛋白質的活性；

A4、增加所述受體菌中乙酰輔酶A羧化酶acc基因或基因簇編碼蛋白質的含量或增強所述acc基因或基因簇編碼蛋白質的活性；

A5、增加所述受體菌中外源烷烴攝入外膜蛋白基因alkL基因編碼蛋白質的含量或增強所述alkL基因編碼蛋白質的活性；

A6、增加所述受體菌中丙二酸單酰輔酶A還原酶基因mcr基因編碼蛋白質的含量或增強所述mcr基因編碼蛋白質的活性；

所述受體菌為含有所述fadR基因、所述fabF基因和所述fabH基因的細菌或真菌。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述受體菌為大腸桿菌；

和/或，

所述acc基因或基因簇來源于谷氨酸棒狀桿菌（Corynebacterium glutamicum）或/和混濁紅球菌（Rhodococcus opacus）；

所述alkL基因來源于除烴海桿菌（Marinobacter hydrocarbonoclasticus）或/和惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）；

所述mcr基因來源于嗜熱光全綠絲菌（Chloroflexus aurantiacus）。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述大腸桿菌為大腸桿菌BW25113；

所述fadR基因編碼序列表中SEQ ID No.2所示的蛋白質；

所述fabF基因編碼序列表中SEQ ID No.14所示的蛋白質；

所述fabH基因編碼序列表中SEQ ID No.16所示的蛋白質；

所述acc基因或基因簇編碼a7）和a8）的蛋白質：

a7）序列表中SEQ ID No.26所示；

a8）序列表中SEQ ID No.27所示；

所述alkL基因編碼序列表中SEQ ID No.29所示的蛋白質；

所述mcr基因編碼序列表中SEQ ID No.37所示的蛋白質。

4.根據權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：

A4是通過向所述受體菌中導入所述acc基因或基因簇實現的；

A5是通過向所述受體菌中導入所述alkL基因實現的；

A6是通過向所述受體菌中導入所述mcr基因實現的。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：

所述fadR基因為序列表中SEQ ID No.1所示的cDNA分子或DNA分子；

所述fabF基因為序列表中SEQ ID No.13所示的cDNA分子或DNA分子；

所述fabH基因為序列表中SEQ ID No.15所示的cDNA分子或DNA分子；

所述acc基因或基因簇為序列表中SEQ ID No.25的第15-3259位所示的cDNA分子或DNA分子；

所述alkL基因為序列表中SEQ ID No.28所示的cDNA分子或DNA分子；

所述mcr基因為序列表中SEQ ID No.36所示的cDNA分子或DNA分子。