[發明專利]一種測定膠原蛋白分子質量的方法有效
| 申請號： | 201710247093.1 | 申請日： | 2017-04-17 |
| 公開（公告）號： | CN106990192B | 公開（公告）日： | 2019-05-21 |
| 發明（設計）人： | 秦磊;張玉瑩;畢景然;劉雨曦;杜明;周大勇;董秀萍;朱蓓薇 | 申請（專利權）人： | 大連工業大學 |
| 主分類號： | G01N30/06 | 分類號： | G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86 |
| 代理公司： | 大連格智知識產權代理有限公司 21238 | 代理人： | 劉琦 |
| 地址： | 116034 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 測定 膠原 蛋白 分子 質量 方法 | ||
1.一種測定膠原蛋白分子質量的方法，其特征在于，具體步驟如下：
S1、制備標準樣品：選用若干分子量分布于40～200kDa的蛋白作為分子質量標準品，所述分子質量標準品的數量大于等于5個；
S2、制備檢測樣品：取待測凍干后的膠原蛋白溶于質量濃度為0.01～0.1％的迭氮鈉溶液中，攪拌至充分溶解，4℃靜置24～48h，制得膠原蛋白液；
所述膠原蛋白液中待測膠原蛋白的終濃度為0.2～10mg/mL；
取所述膠原蛋白液，加入等體積的0.02mol/LNaH2PO4-0.2mol/LNa2SO4緩沖溶液，其中含質量濃度為0.2％十二烷基硫酸鈉，搖床震蕩1～5h，過0.45μm水系膜，得到待測膠原蛋白檢測樣品；
S3、樣品測定：采用TSK-gel G4000-SWxl凝膠過濾色譜柱測定分別步驟S1制得的分子質量標準品及步驟S2制得的待測膠原蛋白檢測樣品，得到分子量標準品以及膠原蛋白的保留時間；
所述TSK-gel G4000-SWxl凝膠過濾色譜柱的規格為7.8mm×30.0cm；
具體檢測條件為：
進樣量：20μL；進樣濃度：0.1～1mg/mL；檢測波長：220nm；
流動相：0.01mol/LNaH2PO4-0.1mol/LNa2SO4緩沖溶液，其中含質量濃度為0.2％十二烷基硫酸鈉；
洗脫流速：0.2～1mL/min；
S4、根據步驟S3測得的分子量標準品保留時間，以標準品分子質量的對數與保留時間做線性回歸，得到膠原蛋白分子量標準曲線；
將步驟S3得到的待測膠原蛋白的保留時間與標準曲線進行比對，即可得到膠原蛋白的分子質量。
2.根據權利要求1所述測定膠原蛋白分子質量的方法，其特征在于，所述標準樣品為肌球蛋白、β-半乳糖苷酶、磷酸酶b、牛血清蛋白、卵清蛋白作為分子質量標準品。
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