[發明專利]抗FtsH2蛋白單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201710246507.9
• 申請日: 2017-04-15
• 公開（公告）號: CN107099505B
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 劉茜;孫麗靜;李輝;張穎君;胡夢蕓;王培楠;李倩影;劉富爽
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院糧油作物研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/40;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/577;G01N33/573;C12R1/91;C12R1/19
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 李巍;王慧鳳

本發明提供一種抗FtsH2蛋白單克隆抗體及其應用，所述抗體由小鼠雜交瘤細胞系30749?22分泌產生；該抗體可用于制備篩選抗逆性狀植物材料的試劑盒。本發明的抗FtsH2蛋白單克隆抗體，可特異性地結合識別重組的和小麥葉片中表達的天然FtsH2蛋白；該抗體是一種IgG1類抗體，與FtsH2蛋白的結合有極強特異性和敏感性；并且單克隆抗體可通過免疫印跡(Western blotting)的方法對植物葉片中的FtsH2蛋白進行定性與半定量分析，用于遺傳改良植物的鑒定，從而篩選抗逆脅迫性高的植物材料。

技術領域

本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及一種單克隆抗體，尤其涉及一種抗FtsH2蛋白單克隆抗體及其應用。

背景技術

FtsH(filamentation temperature-sensitive H)屬于AAA蛋白酶家族，它是由FtsH基因編碼的一種ATP和Zn²⁺依賴型兼職蛋白，兼具ATP酶活性、蛋白水解活性和分子伴侶活性，此基因在生物基因組中廣泛分布。

在真核生物中，已知的FtsH均定位于葉綠體膜或線粒體膜上。FtsH負責細菌原生質膜、線粒體膜、葉綠體膜上的未裝配蛋白的降解，通過及時降解非復合體形式的自由亞基，避免其可能的有害積累。FtsH不僅參與生物體內正常的代謝調節過程，而且與多種逆境脅迫響應密切相關，在抵抗熱激和高滲、鹽害和冷脅迫中起作用。FtsH蛋白除了作為蛋白酶發揮功能外，還作為分子伴侶參與蛋白的裝配和折疊，這種分子伴侶功能與蛋白酶功能獨立存在。發現新的FtsH基因用于作物的遺傳改良也具有明確的目標和意義，申請號為201210104976.4的發明專利“一種ATP-依賴的金屬蛋白酶FtsH”，提供了一種來自嗜熱菌Alicyclobacillus hesperidium的ATP-依賴的金屬蛋白酶FtsH編碼基因，該蛋白具有蛋白水解活性和分子伴侶活性，可應用于農作物的基因改造。

來自于生物體的FtsH蛋白種類較多，功能也不完全相同。在葉綠體中，主要有FtsH1(又稱FTSH蛋白酶1)、FtsH2、FtsH5、FtsH6(又稱FtsH蛋白酶6)、FtsH7、FtsH8和FtsH9，在線粒體中則主要存在FtsH3(又稱FtsH蛋白酶3)、FtsH4、FtsH10以及FtsH11亞型。

目前，已經在枯草芽孢桿菌、乳酸乳球菌等原核生物；人、酵母、擬南芥、煙草、苜蓿等多種真核生物中都發現了它的存在。經研究表明，FtsH是通過寡聚化形成一個六聚環形結構，將蛋白水解活性位點埋在六聚復合孔穴的中央，結構分析表明，原核生物和真核生物的FtsH蛋白都具有共同的保守模塊，包括N端跨膜域、AAA結構域、鋅離子結合模塊等。

在高等植物中，FtsH參與蛋白質量的平衡控制，還與熱激、高滲、光脅迫、低溫、病害等脅迫響應答等多種植物應激生理反應過程。近來多個研究報道該蛋白家族成員在不同的植物，如擬南芥、水稻、玉米和大豆中與環境脅迫的耐受有關，這些脅迫包括鹽脅迫、干旱脅迫和高溫脅迫；但是目前還無抗FtsH蛋白單克隆抗體的相關報道，研發出相關抗體，將其用于篩選抗逆性高的植物材料成為一種發展趨勢。

發明內容

因此，本發明的目的是提供一種抗FtsH2蛋白單克隆抗體及其應用，該單克隆抗體可特異性地結合識別重組的和小麥葉片中表達的天然FtsH2蛋白，并且可用于篩選抗逆脅迫性高的植物材料。

除非特別指明，本發明中的“抗體”是指“包括通常意義上的抗體、構成它的重鏈、輕鏈，及其片段”。

除非特別指明，本發明中的“30749-22雜交瘤細胞株”、“30749-22雜交瘤細胞株”均指“小鼠細胞系30749-22雜交瘤”。

一方面，本發明提供一種小鼠細胞系30749-22雜交瘤。

另一方面，本發明提供一種抗FtsH2蛋白單克隆抗體，所述抗體由小鼠雜交瘤細胞系30749-22分泌產生。