[發明專利]一種表達IgG抗體的微環DNA載體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710244846.3
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN108728463A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 謝亦武
• 申請（專利權）人: 深圳新諾微環生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/13;C07K16/10;A61K39/42;A61P31/18;A61P31/00;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 郎堅

本申請涉及一種表達IgG抗體的微環DNA載體及其制備方法和應用。具體涉及一種用于在體內表達功能完整的IgG抗體的微環DNA載體。所述IgG抗體中和人免疫缺陷病毒(HIV)、其它病原體抗原或癌癥細胞抗原。所述微環DNA載體、IgG抗體能夠用于預防或治療艾滋病(或HIV感染)、其它病原體感染或癌癥等病癥。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種重組基因載體，具體涉及一種用于在體內表達功能完整的IgG抗體的微環DNA載體。

背景技術

單克隆抗體藥物自上個世紀80年代批準上市以來，輸注體內后結合、中和或清除特定的體內抗原，包括細胞因子、細胞膜表面受體和病原體抗原等。單抗藥物廣泛應用于免疫相關、癌癥和傳染病等疾病的預防和治療，取得了非常好的臨床效果。

艾滋病主要是由人免疫缺陷病毒(HIV)感染導致的致死性傳染疾病，在全球范圍已廣泛流行。目前臨床上應用的抗HIV藥物，輔以高效抗逆轉錄病毒療法，可以在一定程度上延長HIV感染者的生存時間和改善其生活質量。但是，由于HIV疫苗研究進展緩慢以及耐藥性問題日益明顯，研發新型抗HIV藥物仍是當務之急。

本發明通過向體內輸注含IgG抗體基因序列的微環DNA載體，利用人或動物內源的蛋白合成機制在體內直接生產抗體蛋白藥物，達到預防和治療疾病的效果。與本發明最相近的技術方案包括：用AAV(腺相關病毒)載體表達HIV中和抗體AAV-anti-HIV(WO2012115980)，或者通過細胞培養技術在體外表達純化HIV中和蛋白或其它IgG抗體。

然而，現有的AAV表達抗體技術存在缺點，包括成本高昂、安全性隱患。具體包括：(a)AAV病毒載體的包裝、純化過程復雜，需要大量細胞培養，耗時耗力；(b)AAV病毒的保存、運輸等過程需要低溫環境，造成成本上升使用不便；(c)AAV病毒外殼容易激起強烈的免疫反應，而且載體中攜帶的DNA序列隨機插入容易導致基因突變，甚至致癌風險。

同樣的，通過細胞培養在體外表達純化HIV抗體或其它IgG抗體的缺點主要是成本高昂，使用不便。具體包括：(a)抗體體外表達純化工藝復雜，花費巨大；(b)蛋白保存、運輸通常需要低溫環境，要求較苛刻；(c)抗體使用需通過靜脈或皮下注射，半衰期有限、需長期使用，加大了患者負擔。

本發明旨在通過構建重組基因載體(尤其是微環DNA)，并利用重組基因載體表達HIV中和抗體(MC.anti-HIV)，從而起到對艾滋病預防和治療的雙重作用。同時，本發明對其它病原體感染、癌癥、自身免疫性疾病或其它病癥的預防和治療提供了可行性和可操作的借鑒和技術教導。

發明內容

本發明涉及一種用于在體內表達功能完整的IgG抗體的微環DNA載體(MC.IgG)，用于體內結合、中和或清除特定的抗原及其關聯的細胞或病原體。

本發明提供了一種表達功能完整的IgG抗體的重組基因載體，所述IgG抗體中和抗原，所述抗原選自人免疫缺陷病毒(HIV)或其它抗原，所述其它抗原選自其它病原體、癌癥細胞或體內其它抗原。在其他方面中，所述其它抗原還選自與自身免疫性疾病相關的抗原。

在一個實施方案中，優選的，所述重組基因載體選自非病毒基因載體；更優選的，所述重組基因載體選自微環DNA載體。

在一個實施方案中，所述重組基因載體為重組表達載體，選自原核表達載體或真核表達載體。優選真核表達載體，更優選用于哺乳動物細胞真核表達的重組表達載體。

在一個實施方案中，所述IgG抗體包含：如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重鏈可變區VH，和如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的輕鏈可變區VL。優選的，所述IgG抗體包含：如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的重鏈，和如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的輕鏈。