[發明專利]一種以苦楝為原料經微生物發酵制備殺蟲劑的方法

在審

• 申請號: 201710243547.8
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN106867947A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 廖祥儒;竇欣;田喬鵬;蔡宇杰;管政兵
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P7/04;A01P21/00;C12R1/07
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技術領域

本發明涉及到解一株淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)H47和短小芽孢桿菌及蘇云金桿菌微生物發酵苦楝制備植物源殺蟲劑的生產方法，屬于微生物和發酵技術領域。

背景技術

苦楝(Melia azedarach)為楝科落葉喬木植物，高10-20m；樹皮灰褐色，縱裂。分枝廣展，小枝有葉痕。葉為2-3回奇數羽狀復葉，長20-40cm；小葉對生，卵形、橢圓形至披針形，頂生一片通常略大，長3-7cm，寬2-3cm，先端短漸尖，基部楔形或寬楔形，多少偏斜，邊緣有鈍鋸齒，幼時被星狀毛，后兩面均無毛，側脈每邊12-16條，廣展，向上斜舉。圓錐花序約與葉等長，無毛或幼時被鱗片狀短柔毛；花芳香；花萼5深裂，裂片卵形或長圓狀卵形，先端急尖，外面被微柔毛；花瓣淡紫色，倒卵狀匙形，長約1cm，兩面均被微柔毛，通常外面較密；雄蕊管紫色，無毛或近無毛，長7-8mm，有縱細脈，管口有鉆形、2-3齒裂的狹裂片10枚，花藥10枚，著生于裂片內側，且與裂片互生，長橢圓形，頂端微凸尖；子房近球形，5-6室，無毛，每室有胚珠2顆，花柱細長，柱頭頭狀，頂端具5齒，不伸出雄蕊管。核果球形至橢圓形，長1-2cm，寬8-15mm，內果皮木質，4-5室，每室有種子1顆；種子橢圓形。花期4-5月，果期10-12月。生于曠野或路旁，常栽培于屋前房后。該植物在濕潤的沃土上生長迅速，對土壤要求不嚴，在酸性土、中性土與石灰巖地區均能生長，是平原及低海拔丘陵區的良好造林樹種，在村邊路旁種植更為適宜。

該種是材用植物，亦是藥用植物，其花、葉、果實、根皮均可入藥，用根皮可驅蛔蟲和鉤蟲，但有毒，用時要嚴遵醫囑，根皮粉調醋可治疥癬，用苦楝子做成油膏可治頭癬。此外，果核仁油可供制潤滑油和肥皂等。根據各家對苦楝的研究，發現苦楝也有殺蟲的效果，其中的的川楝素對菜青蟲等具有很強的胃毒作用，可以破壞中腸組織，阻斷神經傳導而導致害蟲麻痹、昏迷、死亡，因而可用于制備植物源殺蟲劑。

植物源殺蟲劑是直接利用或提取植物的根、莖、葉、花、果、種子等或利用其次生代謝物質制成具有殺蟲作用的活性物質。與生物農藥一樣，植物源殺蟲劑源于天然，與環境相容，可在環境中降解或代謝為簡單的天然化合物。利用合適的植物促生菌發酵苦楝，不僅有利于生理活性物質的提取，還不易造成活性物質的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用。有利于改善植物生長和增強殺蟲效果，有利于環境保護和苦楝植物本身的有效利用。

發明內容

針對現有技術存在的上述缺陷，本發明利用苦楝植物為原料，用2013年6月24日保存于中國典型培養物保藏中心的，保藏編號為：CCTCCNO：M2013283的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47(該菌株以下簡稱：解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283)和市售短小芽孢桿菌及市售蘇云金桿菌發酵制備植物源殺蟲劑，有利于改善植物生長和增強殺蟲效果，有利于環境保護。

本發明的發酵技術方案：

1)菌種準備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養基，于30℃，250r/min震蕩培養12h；所述種子培養基成分按g/L計為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調整pH至7.0。按一定比例混合做種子。

2)發酵液準備：選用質量優良的苦楝，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經攪碎機攪碎后待用。

3)發酵罐空消及空氣管道消毒：按相關說明書進行發酵罐空消。

4)發酵液實消：將步驟2所得苦楝放入發酵罐中，補充自來水至終體積為10L，按相關說明書進行實消滅菌。

5)接種培養：當發酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有苦楝的發酵罐中，25—30℃條件下培養3—12天，設置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設置各其他培養參數培養。

6)出料：培養完畢，放出發酵液，過濾，過濾后所得發酵液即為殺蟲劑成品。

本發明的有益效果：

本發明提供了發酵苦楝制得一種生物源殺蟲劑的方法。本發明制備方法及過程中無污染安全可靠，發酵時間周期短，工藝環節少，簡單易操作，可節省投資和運行費用。與傳統化學藥劑相比，其具綠色安全，環境友好等優勢，且促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用，擁有廣闊的應用前景。

具體實施方法：