[發明專利]一種以苦皮藤為原料經微生物發酵制備殺蟲劑的方法

在審

• 申請號: 201710243532.1
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN106867946A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 廖祥儒;竇欣;田喬鵬;蔡宇杰;管政兵
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P7/04;A01P21/00;C12R1/07
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技術領域

本發明涉及到解一株淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)H47和短小芽孢桿菌及蘇云金桿菌微生物發酵苦皮藤制備植物源殺蟲劑的生產方法，屬于微生物和發酵技術領域。

背景技術

苦皮藤(Celastrus angulatus)為衛矛科南蛇藤屬植物，其為藤狀灌木；小枝常具4-6縱棱，皮孔密生，圓形到橢圓形，白色，腋芽卵圓狀，長2-4mm。葉大，近革質，長方闊橢圓形、闊卵形、圓形，長7-17cm，寬5-13cm，先端圓闊，中央具尖頭，側脈5-7對，在葉面明顯突起，兩面光滑或稀于葉背的主側脈上具短柔毛；葉柄長1.5-3cm；托葉絲狀，早落。聚傘圓錐花序頂生，下部分枝長于上部分枝，略呈塔錐形，長10-20cm，花序軸及小花軸光滑或被銹色短毛；小花梗較短，關節在頂部；花萼鑷合狀排列，三角形至卵形，長約1.2mm，近全緣；花瓣長方形，長約2mm，寬約1.2mm，邊緣不整齊；花盤肉質，淺盤狀或盤狀，5淺裂；雄蕊著生花盤之下，長約3mm，在雌花中退化雄蕊長約1mm；雌蕊長3-4mm，子房球狀，柱頭反曲，在雄花中退化雌蕊長約1.2mm。蒴果近球狀，直徑8-10mm；種子橢圓狀，長3.5-5.5mm，直徑1.5-3mm。花期5-5月。廣泛分布于我國黃河、長江流域的丘陵和山區。

苦皮藤的根皮和莖皮均含有多種強力殺蟲成分，目前已從根皮或種子中分離鑒定出數十個新化合物，特別是從種油中獲得4個結晶，即苦皮藤酯I-Ⅳ、從根皮中獲得5個純天然產物，即苦皮藤素I-V。這些苦皮藤中的殺蟲活性成分均簡稱為苦皮藤素；其中苦皮藤素I對害蟲具有拒食作用，苦皮藤素II、III對小地老虎、甘藍夜蛾等昆蟲有胃毒毒殺作用，苦皮藤毒素IV對昆蟲具有選擇性麻醉作用，苦皮藤素V作用于昆蟲的消化系統，破壞中腸腸壁細胞的質膜及內膜體液穿過腸壁細胞進入消化道，引起昆蟲上吐下瀉、失水而死,因而被用作制備植物性殺蟲劑。

植物在進化中產生具有保護作用的次生代謝物質，這些物質往往可以抵抗其他生物的侵害。以植物次代謝物為主要活性成分的植物源殺蟲劑一般容易降解，不會對土壤與水源形成持久性影響；植物源殺蟲劑一般對魚、鳥、哺乳動物與人毒性較低，使用安全：植物源殺蟲劑對天敵具有一定的選擇作用，有可能控制蟲害的再猖獗。上述優勢使得植物源殺蟲劑成為替代化學農藥防治害蟲很好的選擇。利用合適的植物促生菌發酵苦皮藤，不僅有利于生理活性物質的提取，還不易造成活性物質的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用。有利于改善植物生長和增強殺蟲效果，有利于環境保護和苦皮藤植物本身的有效利用。

發明內容

針對現有技術存在的上述缺陷，本發明利用苦皮藤植物為原料，用2013年6月24日保存于中國典型培養物保藏中心的，保藏編號為：CCTCCNO：M2013283的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47(該菌株以下簡稱：解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283)和市售短小芽孢桿菌及市售蘇云金桿菌發酵制備植物源殺蟲劑，有利于改善植物生長和增強殺蟲效果，有利于環境保護。

本發明的發酵技術方案：

1)菌種準備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養基，于30℃，250r/min震蕩培養12h；所述種子培養基成分按g/L計為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調整pH至7.0。按一定比例混合做種子。

2)發酵液準備：選用質量優良的苦皮藤，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經攪碎機攪碎后待用。

3)發酵罐空消及空氣管道消毒：按相關說明書進行發酵罐空消。

4)發酵液實消：將步驟2所得苦皮藤放入發酵罐中，補充自來水至終體積為10L，按相關說明書進行實消滅菌。

5)接種培養：當發酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有苦皮藤的發酵罐中，25—30℃條件下培養3—12天，設置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設置各其他培養參數培養。

6)出料：培養完畢，放出發酵液，過濾，過濾后所得發酵液即為殺蟲劑成品。

本發明的有益效果：

本發明提供了發酵苦皮藤制得一種生物源殺蟲劑的方法。本發明制備方法及過程中無污染安全可靠，發酵時間周期短，工藝環節少，簡單易操作，可節省投資和運行費用。與傳統化學藥劑相比，其具綠色安全，環境友好等優勢，且促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用，擁有廣闊的應用前景。