[發(fā)明專利]一種發(fā)酵商陸制備殺蟲劑的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710243505.4
• 申請(qǐng)日: 2017-04-14
• 公開（公告）號(hào): CN107027815A
• 公開（公告）日: 2017-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖祥儒;竇欣;田喬鵬;蔡宇杰;管政兵
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N65/08
• 分類號(hào): A01N65/08;A01N63/02;A01P7/04;C12N1/20;C12R1/07
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及到解一株淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)H47和短小芽孢桿菌及蘇云金桿菌微生物發(fā)酵商陸制備植物源殺蟲劑的生產(chǎn)方法，屬于微生物和發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

商陸(Phytolacca acinosa)系為商陸科多年生宿根草本植物，其干燥塊根是一種應(yīng)用歷史悠久的傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。商陸一般株高70-100cm，全株無毛，根粗壯、肉質(zhì)、圓錐形，外皮淡黃色；莖直立、多分枝、綠色或紫紅色、具縱溝；葉互生、橢圓形或卵狀橢圓形，長12-25cm，寬5-10cm，先端急尖、基部楔形而下延，全緣，側(cè)脈羽狀，主脈粗壯；葉柄長1.5-3cm，上面具槽，下面半圓形?？偁罨ㄐ蝽斏騻?cè)生，長10-15cm；花兩性，徑約8mm，具小梗，小梗基部有苞片1及小苞片2；萼通常5片、偶為4片，卵形或長方狀橢圓形，初白色，后變淡紅色；無花瓣、雄蕊8，花藥淡粉紅色(少數(shù)成淡紫色)；心皮8-10，離生。漿果扁球形，徑約7mm，通常由8個(gè)分果組成，熟時(shí)紫黑色。種子腎圓形，扁平，黑色。花期6-8月。果期8-10月。廣布于長江以南紅壤低丘陵地區(qū)，在中國現(xiàn)有分布的品種中主要有商陸(野蘿卜)和垂序商陸。主產(chǎn)河南，湖北，山東，浙江，江西等。商陸根入藥，以白色肥大者為佳，紅根有劇毒，僅供外用；具有通二便，逐水、散結(jié)，治水腫、脹滿、腳氣、喉痹，外敷治癰腫瘡毒；也可作獸藥及農(nóng)藥。果實(shí)含鞣質(zhì)，可提制栲膠。嫩莖葉可供蔬食。

商陸含有多種次生代謝產(chǎn)物，包括美商陸皂苷A、B、D、E、G、F、D2等，美商陸皂苷元，2-羥基商陸酸、商陸酸、美商陸酸、3-氧代-30-甲氧基羰基-23-去甲齊墩果烷-12-烯-28-酸等。另外，有菠菜甾醇、△1-豆甾烯醇等甾醇類成分，以及天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸類成分，并含有多糖，尚有美商陸根抗病毒蛋白和美商陸根抗真菌蛋白R(shí)1、R2，美商陸毒素，有絲分裂原，組胺等。因而具有滅螺、殺螨、殺蟲作用。

目前，植物性殺蟲劑多用有機(jī)溶劑或煎煮提取，不利于節(jié)能且有較大的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)；也會(huì)影響活性物質(zhì)的穩(wěn)定性和遺失活性物質(zhì)；同時(shí)增加成本使得開發(fā)應(yīng)用困難較大，作用效果緩慢，因此給植物源殺蟲劑的研發(fā)和生產(chǎn)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)困難。利用合適的植物促生菌發(fā)酵商陸，不僅有利于生理活性物質(zhì)的提取，還不易造成活性物質(zhì)的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用。有利于改善植物生長和增強(qiáng)殺蟲效果，有利于環(huán)境保護(hù)和商陸植物本身的有效利用。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本發(fā)明利用商陸植物為原料，用2013年6月24日保存于中國典型培養(yǎng)物保藏中心的，保藏編號(hào)為：CCTCCNO：M2013283的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47(該菌株以下簡稱：解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283)和市售短小芽孢桿菌及市售蘇云金桿菌發(fā)酵制備植物源殺蟲劑，有利于改善植物生長和增強(qiáng)殺蟲效果，有利于環(huán)境保護(hù)。

本發(fā)明的發(fā)酵技術(shù)方案：

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按一定比例混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量優(yōu)良的商陸，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得商陸放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來水至終體積為10L，按相關(guān)說明書進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有商陸的發(fā)酵罐中，25—30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明提供了發(fā)酵商陸制得一種生物源殺蟲劑的方法。本發(fā)明制備方法及過程中無污染安全可靠，發(fā)酵時(shí)間周期短，工藝環(huán)節(jié)少，簡單易操作，可節(jié)省投資和運(yùn)行費(fèi)用。與傳統(tǒng)化學(xué)藥劑相比，其具綠色安全，環(huán)境友好等優(yōu)勢(shì)，且促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用，擁有廣闊的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方法：