[發明專利]一種用于檢測人類MGMT基因甲基化突變的多重熒光PCR檢測試劑盒在審
| 申請號： | 201710239924.0 | 申請日： | 2017-04-13 |
| 公開（公告）號： | CN106995850A | 公開（公告）日： | 2017-08-01 |
| 發明（設計）人： | 王漢偉;康燦昆;陳琰 | 申請（專利權）人： | 廈門飛朔生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 廈門市首創君合專利事務所有限公司35204 | 代理人： | 張松亭,姜謐 |
| 地址： | 361000 福建省*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 檢測 人類 mgmt 基因 甲基化 突變 多重 熒光 pcr 試劑盒 | ||
1.一種用于檢測人類MGMT基因甲基化突變的多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：包括：DNA亞硫酸鈉轉化試劑、MGMT檢測引物組、內標引物組、MGMT檢測探針和內標檢測探針；MGMT檢測探針的5’端修飾有第一熒光報告基團，3’端修飾有第一熒光猝滅基團；內標檢測探針的5’端修飾有與第一熒光報告基團不同的第二熒光報告基團，3’端修飾有第二熒光猝滅基團；其中，
MGMT檢測引物組由正向引物MGMT-16-F1和反向引物MGMT-16-R1組成，依次包括如SEQ ID NO 01和02所示的序列；
內標引物組由正向引物ACTB-F1和反向引物ACTB-R1組成，依次包括如SEQ ID NO 03和04所示的序列；
該多重熒光PCR檢測試劑盒的反應體系的組成如下：
MGMT檢測引物組
MGMT檢測探針
內標引物組
內標檢測探針
1×PCR緩沖液
MgCl2
dNTPs
Taq酶
H2O
經DNA亞硫酸鈉轉化試劑處理的DNA模板；
該多重熒光PCR檢測試劑盒的每一反應體系的反應條件均為：95℃預變性5分鐘，1個循環；95℃變性25秒，56℃退火20秒，72℃延伸10秒，15個循環；95℃變性25秒，56℃退火35秒，72℃延伸10秒，30個循環，后30個循環在退火時檢測熒光信號。
2.如權利要求1所述的多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述MGMT檢測探針為MGMT-16-Probe-1，包括如SEQ ID NO 05所示的序列。
3.如權利要求1所述的多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述內標檢測探針為ACTB-Probe-1，包括如SEQ ID NO 06所示的序列。
4.如權利要求1所述的多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述第一熒光報告基團為FAM，所述第一熒光猝滅基團為BHQ1，所述第二熒光報告基團為HEX，第二熒光猝滅基團為BHQ1。
5.如權利要求1至4中任一權利要求所述的多重熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述反應體系的具體組成如下：
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