[發明專利]一種用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架及其制備方法

有效

• 申請號: 201710239037.3
• 申請日: 2017-04-13
• 公開（公告）號: CN107412858B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 郭瑞;李丹;藍詠
• 申請（專利權）人: 廣州貝奧吉因生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/22
• 分類號: A61L27/22;A61L27/38;A61L27/12;A61L27/02;A61L27/50;A61K49/08
• 代理公司: 廣州文智專利代理事務所(特殊普通合伙) 44469
• 代理人: 劉敏

1.一種用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架，其特征在于，所述復合絲素蛋白支架的體積為1.5～2.0mm³，所述復合絲素蛋白支架上負載有3×10⁵～7×10⁵個牙髓干細胞，所述復合絲素蛋白支架是以2～10wt％絲素蛋白溶液、以及羥基磷灰石和超順磁性四氧化三鐵形成的分散液為原料制備而得，所述羥基磷灰石與超順磁性四氧化三鐵的質量比為0.1g﹕0.25～1.0mg，所述羥基磷灰石和超順磁性四氧化三鐵形成的分散液與絲素蛋白溶液的體積比為0.5～1.5﹕10。

2.根據權利要求1所述的用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架，其特征在于，所述羥基磷灰石與超順磁性四氧化三鐵的質量比為：0.1g﹕0.25～0.5mg。

3.根據權利要求1所述的用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架，其特征在于，所述羥基磷灰石與超順磁性四氧化三鐵形成的分散液與絲素蛋白溶液的比為1﹕10。

4.權利要求1～3任一項所述的用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)、將0.25～1.0mg超順磁性四氧化三鐵和0.1g羥基磷灰石分散于0.5～1.5ml去離子水中，再超聲6～15min，得到分散液；

(2)、將8～15ml的2～10wt％的絲素蛋白溶液加入到步驟(1)的分散液中，室溫渦旋3～8min，冷藏結晶，冷凍干燥；

(3)、將30～70μl濃度為1×10⁷個/ml的牙髓干細胞懸浮液滴加到步驟(2)的復合絲素蛋白支架上，培養孵育，即得負載牙髓干細胞的復合絲素蛋白支架。

5.根據權利要求4所述的用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述冷藏結晶的溫度為-80℃。

6.根據權利要求4所述的用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述冷凍干燥條件為-60℃，48h。

7.根據權利要求4所述的用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述絲素蛋白的制備方法為：將蠶繭加入去離子水中，同時加入NaHCO₃，煮沸20～40min取出，清洗至中性，再重復煮一遍取出，烘干，即得。

8.根據權利要求4所述的用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述絲素蛋白溶液的制備方法為：在絲素蛋白中加入濃度為9.3mol/L的溴化鋰溶液，40～60℃水浴加熱溶解4～6h，取出絲素蛋白混合液透析3～5天，每天更換1～3次去離子水，將完成透析的溶液離心，取出上層清液置于濃度為10～25wt％的聚乙二醇溶液中進行反透析8～24h，更換1～2次聚乙二醇溶液，即得絲素蛋白溶液。

9.根據權利要求8所述的復合絲素蛋白支架用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架的制備方法，其特征在于，所述透析的截留分子量為8～14kD。

10.根據權利要求4所述的用于MRI造影的骨誘導復合絲素蛋白支架的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述牙髓干細胞懸浮液的制備方法：取長滿牙髓干細胞的培養瓶，棄去舊的培養基，用磷酸緩沖液清洗2遍；取0.6～1ml的胰蛋白酶加入到細胞培養瓶中，置于37℃，5％CO₂的培養箱內消化1～2min；待細胞形態開始皺縮，加入等體積的含有10％的胎牛血清和1％的青鏈霉素混合液的DMEM-F12的培養液，并輕輕反復吹打培養瓶的底部，將細胞移入離心管，1000r/min離心5min，棄去上清液，加入1ml的培養液，吹打混勻，用細胞計數板進行計數；將細胞懸浮液的濃度調整為1×10⁷個/ml。