[發明專利]一種無花果種苗組織培養方法

有效

• 申請號: 201710238864.0
• 申請日: 2017-04-13
• 公開（公告）號: CN107094621B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 郭正兵;蔡善亞
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 許丹丹

1.一種無花果種苗組織培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)外植體準備：布蘭瑞克早春無花果植株新梢萌發時，從其植株上剪取2-4cm嫩梢，然后依次進行清洗、修剪成帶腋芽莖段、防褐化處理和消毒處理，備用；

(2)初代培養：接種前，誘導培養基熱壓消毒滅菌，主要成分為：WPM+1.0-2.0TDZmg/L+NAA0.1-0.2mg/L+0.2-0.5％活性炭，pH＝6.0，然后將步驟(1)處理所得外植體下端扦插入該培養基中，培養溫度為22-30℃，光照強度1500-2500lux，待小苗長至0.4-0.6厘米時切下，轉到增殖培養基中進行繼代培養；

(3)繼代培養：將步驟(2)初代培養后的叢生苗每4-6株切成一塊，接種到繼代培養基上，其主要成分為：MS+6-BA1.2-1.6mg/L+NAA0.1-0.2mg/L+GA₃0.5-1.0mg/L培養基，pH值為5.8，在溫度23-37℃，光照強度1500-2500lux，每日光照一小時條件下培養；

(4)生根培養：將步驟(3)繼代培養后的芽苗轉移到生根培養基上培養，主要成分為：1/2MS+IBA0.2-0.8mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+0.2-0.5％活性炭+蔗糖10-30g/L，pH＝5.8，在溫度為23-27℃，光照強度500-2500lux，每日光照12小時，培養20-25天后，將形成白色短根的芽苗進行馴化培養；

(5)幼苗馴化：將生根培養后的芽苗移入馴化基質中進行培養，培養溫度為10-20℃,濕度為60-80％，遮光率為50-80％，培養5-7天，采用噴霧狀澆水；所述馴化基質是由珍珠巖、石英砂和泥碳按體積比1:0.5:2混合而成的馴化基質。

2.根據權利要求1所述的無花果種苗組織培養方法，其特征在于，步驟(1)所述清洗的方法為：用洗衣粉刷洗外植體表面，再用自來水反復沖洗干凈。

3.根據權利要求1所述的無花果種苗組織培養方法，其特征在于，步驟(1)所述修剪成帶腋芽莖段的方法為：在無菌條件下將嫩梢切成0.5cm左右的帶腋芽莖段，放入保鮮袋中備用。

4.根據權利要求1所述的無花果種苗組織培養方法，其特征在于，步驟(1)所述防褐化處理的方法為：將裝有帶腋芽莖段的保鮮袋放入2-5℃的冰箱，預冷12-24小時后取出，擦干表面水分，置于PVP(聚乙烯吡咯烷酮)1500mg/L溶液中浸泡20-30分鐘，備用。

5.根據權利要求1所述的無花果種苗組織培養方法，其特征在于，步驟(1)所述消毒處理的方法為：將進行過防褐化處理的外植體用75％酒精浸泡4～5s，后用無菌水沖洗4～6次，然后再放入0.1％升汞溶液浸泡6～7min，在以上過程中要不斷地搖動，以便外植體與溶液充分接觸，再用無菌清水反復沖洗外植體數遍，直至將殘留升汞完全沖洗干凈，最后用無菌紙吸干外植體表面水分，備用。