[發明專利]用作疫苗的多糖與去毒大腸桿菌(E.COLI)不耐熱腸毒素(LT)的偶聯

在審

• 申請號: 201710238821.2
• 申請日: 2011-04-29
• 公開（公告）號: CN107261129A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 徐悠深;郭怡玲;洪國展;呂元馨;阮大同
• 申請（專利權）人: 財團法人生物技術開發中心
• 主分類號: A61K39/09
• 分類號: A61K39/09;A61K39/102;A61K47/64;A61P31/04
• 代理公司: 北京律盟知識產權代理有限責任公司11287
• 代理人: 關旭穎

本申請是申請日為2011年4月29日、申請號為201180021528.1、發明名稱為“用作疫苗的多糖與去毒大腸桿菌(E.COLI)不耐熱腸毒素(LT)的偶聯”的發明專利申請的分案申請。

相關申請案交叉參考

本發明主張對在2010年5月3日申請的第61/330,650號美國臨時專利申請案的優先權，其揭示內容是全文以引用方式并入本文中。

技術領域

本發明涉及用作疫苗的多糖與去毒大腸桿菌(E.COLI)不耐熱腸毒素(LT)的偶聯。

背景技術

多糖疫苗在不使用載體蛋白制備時缺少免疫記憶反應。當前已知的偶聯疫苗包括細菌莢膜多糖，例如流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)b型、腦膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)C組和肺炎鏈球菌(Streptococcus pnemoniae)血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、19F、23F。所述疫苗共價偶聯到載體蛋白，例如破傷風類毒素、白喉類毒素、CRM197、突變體無毒白喉毒素或腦膜炎奈瑟球菌外膜蛋白。這些多糖偶聯疫苗尤其在年齡小于兩歲的嬰兒中可誘導T細胞依賴反應；且其可促發長期免疫記憶，產生高親和力抗體，且可降低鼻咽移生和傳播速率。

然而，當前銷售的大部分細菌多糖偶聯疫苗應用破傷風類毒素(TT)或白喉類毒素(DT)作為載體蛋白。TT和DT，這兩種類毒素蛋白是用于嬰兒/兒童的合法疫苗；在短期內高頻率接種TT和DT可能會影響免疫原性和安全性。(降低的對同時投予嬰兒的具有共同蛋白表位的復合疫苗的反應(Reduced response to multiple vaccines sharing common protein epitopes that are administered simultaneously to infants).感染與免疫(Infect.Immun.)1998；66(5):2093-8；組合肺炎球菌-腦膜炎球菌疫苗在嬰兒中的免疫原性和安全性：隨機控制試驗(Immunogenicity and safety of a combination pneumococcal-meningococcal vaccine in infants:a randomized controlled trial).美國醫學協會雜志(JAMA)2005；293(14):1751-8)。因此，本發明提供用于偶聯疫苗的新型載體蛋白LTS61K。

發明內容

本發明包括多糖與去毒大腸桿菌不耐熱腸毒素(LT)的偶聯，其可用作疫苗來針對諸如流感嗜血菌和肺炎鏈球菌等傳染性細菌的效應進行保護或免疫且減輕由腸毒性大腸桿菌引起的旅行性腹瀉。

本發明的一個方面涉及以純化形式分離的共價偶聯的多糖-LTS61K疫苗。這些偶聯產物在哺乳動物中具有非常優秀的免疫原性和殺細菌性特性。另一方面涉及將有效量的偶聯多糖-LTS61K疫苗投予需要抵抗流感嗜血菌b型(Hib)的哺乳動物的方法。本發明疫苗刺激T輔助細胞反應，在再次暴露后展現強加強反應且具有高抗體效價。

本發明的另一方面涉及通過還原胺化和分離經純化偶聯產物產生偶聯多糖-LTS61K的方法。根據本發明，已發現偶聯多糖與LTS61K來制備本發明疫苗的優選方法是高碘酸鹽氧化天然PS，之后進行還原胺化。

本發明偶聯物中采用的LTS61K闡述于以下文獻中：在2007年8月13日申請的第PCT/US2007/075801號PCT申請案；在2007年7月18日申請的第US 11/779419號美國申請案、在2008年5月15日申請的US 12/120,953和在2010年3月23日申請的US 12/729,649；以及在2006年10月27日申請且在2009年1月獲準的第95139707號臺灣專利申請案。這些申請案中的每一者中闡述的標的物都是以引用方式并入本文中。

附圖說明

圖1概括性繪示LT載體蛋白。

圖2是Hib PRP糖的結構圖。

圖3展示若干種偶聯方法。

圖4展示本發明的還原胺化方法。

圖5繪示PRP與LTS61K通過還原胺化偶聯。

圖6展示在NaIO₄處理后經氧化PRP的HPLC-SEC-RI洗脫曲線。

圖7是經氧化PRP的NMR譜。此光譜確認在高碘酸鹽氧化后在PRP上形成醛基團。