[發(fā)明專利]一種定量和預(yù)測組培苗硝酸鹽代謝能力及氮同位素分餾值的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710237330.6
• 申請日: 2017-04-12
• 公開（公告）號: CN107114238B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳沿友;張開艷;吳沿勝;饒森;蘇躍;方蕾;李環(huán);劉叢強(qiáng);王世杰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院地球化學(xué)研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標(biāo)事務(wù)所 52100
• 代理人: 劉艷

1.一種定量和預(yù)測組培苗硝酸鹽代謝能力及氮同位素分餾值的方法，其特征在于：包含以下步驟：

第一，通過組織培養(yǎng)獲得被考察植物的無性系組培苗；

第二，配置不同硝酸鹽濃度的培養(yǎng)基，測定用于配置前述培養(yǎng)基的硝酸鹽藥品的穩(wěn)定氮同位素值δ¹⁵N_substrate；

第三，分別將無性系組培苗接種在上述不同硝酸鹽濃度的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；

第四，分別取出經(jīng)過上述培養(yǎng)的無性系組培苗的葉片，測定組培苗葉片的穩(wěn)定氮同位素值δ¹⁵N_foliar；

第五，根據(jù)測定的葉片穩(wěn)定同位素值δ¹⁵N_foliar，計算出各硝酸鹽濃度梯度下組培苗葉片穩(wěn)定氮同位素分餾值Δ¹⁵N；

第六，根據(jù)測定的葉片穩(wěn)定同位素值δ¹⁵N_foliar，計算出各硝酸濃度梯度下的組培苗同位素同化比Ps和硝酸鹽代謝能力NSC；

第七，以酶動力學(xué)的米氏方程建立穩(wěn)定氮同位素同化比與硝酸鹽濃度的關(guān)系模型；

第八，依據(jù)上述模型求出被考察的培養(yǎng)基中組培苗的穩(wěn)定氮同位素同化比；

第九，依據(jù)被考察的培養(yǎng)基中組培苗的穩(wěn)定氮同位素同化比Ps，確定被考察的培養(yǎng)基中組培苗的硝酸鹽代謝能力NSC；

第十，根據(jù)被考察的培養(yǎng)基中組培苗的穩(wěn)定氮同位素同化比Ps，估算出不同硝酸鹽濃度下的Δ¹⁵N；在第五步驟中，組培苗葉片穩(wěn)定氮同位素分餾值Δ¹⁵N，Δ¹⁵N＝δ¹⁵N_substrate-δ¹⁵N_foliar；在第六步驟中，組培苗穩(wěn)定氮同位素同化比Ps為組培苗葉片穩(wěn)定氮同位素值δ¹⁵N_foliar與硝酸鹽的穩(wěn)定氮同位素值δ¹⁵N_substrate的比值，穩(wěn)定氮同位素同化比Ps等于硝酸鹽代謝能力NSC；在第七步驟中，米氏方程的表達(dá)式為：這里的Ps為組培苗同位素同化比，c為培養(yǎng)基中硝酸鹽濃度，Ps_max和Km值為米氏方程的常數(shù)；在第九步驟中，被考察的培養(yǎng)基中組培苗的硝酸鹽代謝能力NSC與組培苗的穩(wěn)定氮同位素同化比Ps相同，即NSC＝Ps；在第十步驟中，估算出不同硝酸鹽濃度下的Δ¹⁵N的公式為：Δ¹⁵N＝δ¹⁵N_substrate-Ps×δ¹⁵N_substrate。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定量和預(yù)測組培苗硝酸鹽代謝能力及氮同位素分餾值的方法，其特征在于：在第三步驟中，分別將帶有1個單芽的無性系組培苗接種在上述不同硝酸鹽濃度的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時間超過4周。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定量和預(yù)測組培苗硝酸鹽代謝能力及氮同位素分餾值的方法，其特征在于：在第四步驟中，分別取出100mg以上的上述經(jīng)過4周以上培養(yǎng)的無性系組培苗的葉片，測定組培苗葉片的穩(wěn)定氮同位素值δ¹⁵N_foliar。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定量和預(yù)測組培苗硝酸鹽代謝能力及氮同位素分餾值的方法，其特征在于：在第八步驟中，依據(jù)米氏方程模型中的Ps_max和Km值，并將被考察的培養(yǎng)基中的硝酸鹽濃度值作為c代入上述米氏方程模型求出被考察的培養(yǎng)基中組培苗的穩(wěn)定氮同位素同化比。