[發明專利]嗜水氣單胞菌表面特異性抗原AhsA及其抗體和應用

在審

• 申請號: 201710233498.X
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN107164348A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 權春善;許永斌;劉爽;王路路;陳金利
• 申請（專利權）人: 大連民族大學
• 主分類號: C12N9/52
• 分類號: C12N9/52;C12N15/57;C07K16/06;C07K16/12;G01N33/569
• 代理公司: 大連智高專利事務所(特殊普通合伙)21235
• 代理人: 胡景波

1.嗜水氣單胞菌表面特異性抗原AhsA，其特征在于，由基因片段在大腸桿菌細胞中表達，并經過純化濃縮得到；所述基因片段序列如下：

TCAGCTGCCGCTCTGGGGGTCGTCGATCACCAGCTTGCCATCCTTGACCGGGATGGTGGCGCCGGGGGCC

TTGTTCATGCGGATCACCCCTTCCTGACCGGCGAGGCGGTAGGTGACGTCATAGCCAAGGGTGCGGGTGC

TGCTCTCTTGCACCGTCTTGCAGCGCTGTTCGGTGGTGGTGTAGGTATCACCGGCCTGCATGTTGCCCTG

CACCTGGTTGCCGGCATAGCCACCCGCCACGGCGCCTGCGGCGGTCGCCACCTTCTTGCCGTTGCCGCCA

CCAAACTGGTTGCCGAGCACCCCGCCCAGCGCCGCACCGACCACGGTACCCAGGATCTTGTGCTCGTCCT

GCACCGGTTTGCGGTGGGTCACGCTGACGTTGCGACACTCCTGACGGGGGGTCTTGATGGTCTCGGTCAC

CGCTTTGCTGGCCAGCACTTCGGCGAACTGAGGCTGTGATGAAAACAGGGATCCGCTGGCGGCGGCTGAC

AAGGCCAGCGCAGAGGCCACACCGATCCCGACTCCTGCCAACATGGATTTGTTCAT。

2.如權利要求1所述的嗜水氣單胞菌表面特異性抗原AhsA，其特征在于，經純化濃縮的抗原AhsA濃度為10mg/L。

3.如權利要求1所述的嗜水氣單胞菌表面特異性抗原AhsA，其特征在于，制備方法為：將所述的基因片段的編碼區克隆進pET-28a載體，轉化大腸桿菌BL21感受態細菌；待感受態細菌生長至對數生長期前期，以0.5mM IPTG誘導表達AhsA蛋白，25℃誘導24小時后離心收集菌體；

將收集的菌體以20mM Tris-HCl,150mM NaCl重懸，超聲裂解，離心取裂解液上清液，將上清液通過鎳柱純化，以咪唑溶液洗脫，再進行凝膠過濾純化。

4.一種利用權利要求1所述的嗜水氣單胞菌表面特異性抗原AhsA制備的抗體，其特征在于，制備方法如下：

S1.原核表達和純化表面特異性抗原AhsA；

S2.免疫家兔，獲得含嗜水氣單胞菌多克隆抗體的血清；

S3.純化血清，獲得純化的基于嗜水氣單胞菌表面特異性抗原AhsA的多克隆抗體。

5.如權利要求4所述的嗜水氣單胞菌表面特異性抗原AhsA制備的抗體在特異性的識別嗜水氣單胞菌方面的應用。