[發(fā)明專利]一種ASE?HPLC法測定仙茅中的仙茅苷含量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710232491.6
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN106918666A
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王麗麗;廖強;歐妮;韋日偉;陳學(xué)松
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙)44295
• 代理人: 蔡國

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)檢測領(lǐng)域，尤其是一種ASE-HPLC法測定仙茅中仙茅苷含量的方法。

背景技術(shù)

2015年藥典記錄了取本品粉末(過三號篩)約1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2小時，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液20ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

液相色譜檢測條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液(21：79)為流動相；檢測波長為285nm。理論板數(shù)按仙茅苷峰計算應(yīng)不低于3000。

藥典的方法操作過程復(fù)雜，對操作人員的操作技能要求高。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述不足，本發(fā)明旨在提供一種ASE-HPLC法測定仙茅中仙茅苷含量的方法，該方法將ASE萃取與HPLC檢測進行結(jié)合，并將藥典方法中流動相的體積比進行了優(yōu)化，以達到更好的實驗效果。

為了實現(xiàn)上述技術(shù)效果，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種ASE-HPLC法測定仙茅中仙茅苷含量的方法，依次包括下述步驟：

步驟1：采用ASE法用甲醇萃取仙茅粉末，并收集甲醇萃取液；

步驟2：采用HPLC法測定甲醇萃取液中的仙茅苷含量，其中，采用的流動相為乙腈-0.1％磷酸。

優(yōu)選地，所述的步驟1具體包括下述子步驟：

步驟S1：將仙茅樣品粉碎，過三號篩，取1g與0.5g硅藻土混合；

步驟S2：將步驟1所得的混合物裝于放有濾膜的10ml ASE萃取池中，加硅藻土至與池口平行；

步驟S3：用甲醇萃取，萃取結(jié)束后，用甲醇將萃取液定容至50ml，在15000r/min下離心5min，取上清液。

優(yōu)選地，步驟S3所述的萃取參數(shù)為：溫度為90℃，時間為5min，次數(shù)為2次，沖洗體積為100％，吹掃時間為60s。

優(yōu)選地，步驟2所述的HPLC法的檢測參數(shù)為：色譜柱為Thermo Syncronis C18，3*100mm，3μm；柱溫為40℃；流速為0.5mL/min；流動相為體積比等于19：81的乙腈-0.1％磷酸；檢測波長為285nm。

本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明提高了溫度降低溶劑的黏度，減少了溶劑進入樣品基體的阻止，增加了溶劑進入樣品基體的擴散，降低溶劑和樣品基體之間的表面張力，使溶劑溶解待測物的容量增加；

2、由于液體對溶質(zhì)的溶解能力遠大于氣體對溶質(zhì)的溶解能力，故萃取液體的沸點隨壓力升高而提高，從而使溶劑在高溫高壓下仍保持在液態(tài)。

3、采用本發(fā)明所述的檢測方法測定仙茅苷對照品在0.0102～0.0612μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；

4、本發(fā)明所述的ASE提取方法重復(fù)性良好；

5、本發(fā)明考察了甲醇、乙酸乙酯、乙醇，以提取率高低、雜質(zhì)多少為依據(jù)選出較佳溶劑，結(jié)果顯示甲醇提取率最高，依次到乙醇、乙酸乙酯；乙醇提取率高于藥典，但峰型差；乙酸乙酯萃取液需蒸干定容后才能測定，操作較為繁瑣；所以選擇甲醇作為提取溶劑；

6、本發(fā)明采用3因素3水平正交試驗考察了對提取效率影響較大的三個因素：萃取溫度、靜態(tài)萃取時間、循環(huán)次數(shù)，通過試驗結(jié)果，確定較優(yōu)的ASE參數(shù)，結(jié)果顯示：萃取溫度對仙茅苷的含量影響最大，其次是循環(huán)次數(shù)和靜態(tài)萃取時間；最終確定較佳ASE參數(shù)為萃取溫度90℃，靜態(tài)萃取時間5min，循環(huán)提取2次。

附圖說明

圖1為以仙茅苷對照品的濃度(μg)-峰面積進行線性回歸圖；

圖2為仙茅苷對照品的色譜圖；

圖3為采用藥典方法測定的樣品色譜圖；

圖4為采用ASE-HPLC法測定的樣品色譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式，對本發(fā)明的權(quán)利要求做進一步的詳細說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權(quán)利要求保護范圍內(nèi)所做的有限次修改，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求保護范圍內(nèi)。

實施例1

1、儀器設(shè)備及試劑

1.1儀器：

電子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶劑萃取儀(美國DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。

1.2試劑：

水：符合GB/T 6682規(guī)定的一級水；

乙腈(C₂H₃N)：色譜純；