[發明專利]一種壯腰健腎丸微中生物限度的檢查方法

在審

• 申請號: 201710232448.X
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN107091920A
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 羅達龍;黃林杰;李夷君;覃藍;陳學松
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙)44295
• 代理人: 蔡國

1.一種壯腰健腎丸微中生物限度的檢查方法，其特征在于，依次包括下述步驟：

1)菌液制備

2)供試液制備

3)方法建立及回收率試驗

常規法：

試驗組：吸取1:10供試液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的試驗菌懸液，搖勻，分別從試驗菌試管中吸取1ml至平皿中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基；另從真菌試管中分別吸取1ml至平皿中，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基；每株試驗菌平行制備2個平皿；

菌液對照組：吸取胰酪大豆胨液體培養基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的試驗菌懸液，搖勻，分別從試驗菌試管中吸取1ml至平皿中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基；另從真菌試管中分別吸取1ml至平皿中，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基；每株試驗菌平行制備2個平皿；

供試品組：吸取1:10供試液1ml至平皿，平行制備4個平皿，其中2個傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基，另外2個傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基；

稀釋劑組：吸取胰酪大豆胨液體培養基1ml至平皿，平行制備4個平皿，其中2個傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基，另外2個傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基。

各平皿傾注規定的瓊脂培養基，待凝固后，分別置規定溫度培養3－5d，測定需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數，計算其回收率。

4)控制菌檢驗方法的建立及驗證

4.1)菌懸液制備

取含菌量為1000～10000cfu/ml的銅綠假單胞菌懸液，用0.9％無菌氯化鈉溶液稀釋制成含菌數為10～100cfu/ml的菌懸液，備用。

取經33℃培養24h的大腸埃希菌、銅綠假單胞菌胰酪大豆胨液體培養液，用0.9％無菌氯化鈉溶液制成含菌數為10～100cfu/ml的菌懸液，備用；

4.2)供制備試液

4.3)試驗方法：

取供試品組樣品做大腸埃希菌、耐膽鹽革蘭陰性菌和沙門氏菌檢查；

取供試品組樣品，加入相應的陽性菌菌液1ml進行培養，作大腸埃希菌、耐膽鹽革蘭陰性菌和沙門氏菌檢查；

取稀釋液10ml做大腸埃希菌、耐膽鹽革蘭陰性菌和沙門氏菌檢查，作為陰性對照。

2.根據權利要求1所述的一種壯腰健腎丸微中生物限度的檢查方法，其特征在于，所述的菌液制備的制備方法為：取經33℃培養24h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌胰酪大豆胨液體培養液及25℃培養24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液體培養液，用0.9％無菌氯化鈉溶液制成含菌數為1000～10000cfu/ml的菌懸液，備用；取經25℃培養7天的黑曲霉沙氏葡萄糖瓊脂斜面，加入5ml含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的0.9％無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，用帶有棉花的球形吸管吸出孢子懸液，用含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的0.9％無菌氯化鈉溶液制成含孢子數為1000～10000cfu/ml的孢子懸液，備用。

3.根據權利要求1所述的一種壯腰健腎丸微中生物限度的檢查方法，其特征在于，所述的供試液的制備方法為：取本品10g，加入預熱至45℃的胰酪大豆胨液體培養基至100ml，45℃氣浴振搖30min，混勻，作為1:10供試液。

4.根據權利要求1所述的一種壯腰健腎丸微中生物限度的檢查方法，其特征在于，所述的大腸埃希菌的制備方法為：取1：10供試液10ml接種至100ml胰酪大豆胨液體培養基中，33℃培養24h。取培養物1.0ml，接種至100ml麥康凱液體培養基中，44℃培養24h，取麥康凱液體培養物劃線接種于麥康凱瓊脂平板，33℃培養24h，觀察其菌落形態。

5.根據權利要求1所述的一種壯腰健腎丸微中生物限度的檢查方法，其特征在于，所述的耐膽鹽革蘭陰性菌的制備方法為：取10ml腸道菌增菌液體培養基管1支，加入1:10的供試液1mL，，33℃培養24h。取培養物劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板，33℃培養24h，觀察其菌落形態。

6.根據權利要求1所述的一種壯腰健腎丸微中生物限度的檢查方法，其特征在于，所述的沙門氏菌的檢查方法為：取本品10g，加入100ml胰酪大豆胨液體培養基中，33℃培養24h。取培養物0.1ml，接種至10mlRV沙門菌增菌液體培養基中，33℃培養24h，取RV沙門菌增菌液體培養物劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂平板，33℃培養24h，觀察其菌落形態。