[發明專利]一種具有抑制馬鈴薯黑痣病的昆蟲病原線蟲共生菌及應用

有效

• 申請號: 201710229005.5
• 申請日: 2017-04-10
• 公開（公告）號: CN106916768B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 楊帥;閔凡祥;高云飛;王文重;魏琪;董學志;呂典秋;王曉丹;王玲
• 申請（專利權）人: 黑龍江省農業科學院植物脫毒苗木研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A01N63/20;A01P3/00;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 侯靜

一種具有抑制馬鈴薯黑痣病的昆蟲病原線蟲共生菌及應用，它涉及一種昆蟲病原線蟲共生菌及應用。該菌為伯氏致病桿菌(Xenorhabdus bovineii)HEB01，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2016年3月9日，保藏號CGMCC NO.12193。用于防治馬鈴薯黑痣病。本發明致病桿菌HEB01具有較強的抑制馬鈴薯黑痣病菌菌絲生長的能力，且隨著體積濃度的增加而增大，抑菌效果顯著。同時，該菌具有培養條件要求低、持效期長、來源環保無毒性等特點，使其具有很好的開發應用前景。

技術領域

本發明涉及一種昆蟲病原線蟲共生菌及應用。

背景技術

中國是馬鈴薯種植大國，在馬鈴薯主糧化等戰略的推動下，我國馬鈴薯產業得到了快速發展。然而，隨著種植面積的不斷擴大，由輪作制度不健全、脫毒種薯監管不完善等諸多原因造成的土傳病害普遍發生且逐年加重問題，嚴重影響了馬鈴薯產業的健康發展。

馬鈴薯黑痣病是馬鈴薯生產上最具威脅的土傳病害之一，可以在塊莖表面形成黑痣、裂口等癥狀嚴重影響馬鈴薯(尤其是種薯)的品質和商品性，造成巨大經濟損失，同時其病原立枯絲核菌還可在苗期引起潰瘍病，在苗期造成危害。研究表明，該病原菌環境適應能力極強，能夠通過菌核在塊莖上、土壤中或菌絲體在植株殘體上越冬，待到次年氣候條件適宜時，對馬鈴薯芽眼、幼苗莖基部、匍匐莖以及薯塊表面進行侵染，從而對產量和品質造成危害。目前，該病在我國普遍發生，一般年份發病率為15％-30％，嚴重年份可達到70％以上，嚴重威脅著馬鈴薯產業的發展。

昆蟲病原線蟲共生菌是存在于昆蟲病原線蟲腸道內的一類革蘭氏陰性細菌，屬腸桿菌科(Enterobacteriaceae)，包括致病桿菌屬(Xenorhabdus)、光桿狀菌屬(Photorhabdus)和沙氏菌屬(Serratia)，其分別與斯氏線蟲屬(Steinernema)、異小桿線蟲屬(Heterorhabditis)及擬異小桿線蟲屬(Heterorhabditidoides)的線蟲共生。在自然界，此類細菌存在于3齡侵染期線蟲的腸道內，隨著線蟲的侵染，而被攜帶到寄主體內并釋放到血腔中，經大量繁殖，產生毒素，在48之內就能殺死寄主。國內外研究表明，此類細菌在離體人工培養時，也能夠產生多種具有抑菌、殺蟲、抗病活性代謝物等成份，因此，對昆蟲病原線蟲共生菌的開發和利用，已成為農業及醫藥等領域的研究熱點，成為當前具有較大開發潛力和應用前景的一類重要的新型生物資源。

發明內容

本發明的目的是為了提供一種具有抑制馬鈴薯黑痣病的昆蟲病原線蟲共生菌及應用。

本發明的一種具有抑制馬鈴薯黑痣病的昆蟲病原線蟲共生菌，它為伯氏致病桿菌(Xenorhabdus bovineii)HEB01，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2016年3月9日，保藏號CGMCCNO.12193。

它用于防治馬鈴薯黑痣病。

本發明具有抑制馬鈴薯黑痣病的昆蟲病原線蟲共生菌為革蘭氏陰性菌，在營養瓊脂培養基上為乳黃色菌落，圓形，微凸，邊緣不整齊，隨著時間延長顏色加深；在NBTA培養基上，初生型可吸收溴麝香百里酚藍(BTB)，形成藍色菌落，次生型不能吸收呈紫色菌落。根據《常見細菌系統鑒定手冊》方法進行生理生化指標測定，結果表明：昆蟲病原線蟲共生菌對硝酸還原酶、過氧化氫酶、氧化酶、脲酶、苯丙氨酸還原酶陰性，蛋白酶、檸檬酸鹽、色氨酸還原酶及染料吸收為陽性。

本發明具有抑制馬鈴薯黑痣病的昆蟲病原線蟲共生菌可在NBTA培養基上生長，生長溫度為28℃，最適pH為7.2～7.4，轉速180r/min。NBTA培養基由牛肉膏5g、蛋白胨10g、營養瓊脂20g、氯化鈉5g、溴麝香百里酚藍(BTB)0.025g、氯化三苯基四氮唑(TCC)0.04g和蒸餾水1000mL組成。