[發(fā)明專利]Glypican?1蛋白在胰腺癌診斷中的應用、陽性外泌體濃度的檢測方法及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710227929.1
• 申請日: 2017-04-10
• 公開（公告）號: CN106950374A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 肖明兵;朱凈;郁莉莉;倪潤洲;江楓;陸翠華;倪溫慨;鮑柏軍;吳紅培
• 申請（專利權(quán)）人: 南通大學附屬醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/532;G01N21/65
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，用于制備診斷胰腺癌的產(chǎn)品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，所述產(chǎn)品為芯片、檢測試劑或檢測試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，所述芯片包括蛋白芯片，所述檢測試劑盒包括蛋白免疫檢測試劑盒。

4.一種Glypican-1陽性外泌體濃度的檢測方法，其特征在于，為納米等離子體增強散射方法。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的Glypican-1陽性外泌體濃度的檢測方法，其特征在于，所述納米等離子體增強散射方法所用檢測試劑包括以下組成：

（Ⅰ）氨基功能化的玻璃載片、甲醇、氮氣流、50孔聚二甲基硅氧烷膜；

（Ⅱ）磷酸鹽緩沖洗滌液，pH值為7.4，其成分為：140mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na₂HPO₄，1.8mM KH₂PO₄；

（Ⅲ）封閉液為含5%牛血清蛋白的PBS，pH值為7.4，其成分為：PBS，5%BSA；

（Ⅳ）羧基功能化的金納米顆粒：50nm金納米球、25×60nm金納米棒；

（Ⅴ）MES溶液，pH值為4.7，其成分為：2-（N-嗎啉代）乙磺酸，用純水配制；

（Ⅵ）濃度為5mM的EDC/PBS溶液、EDC / NHS溶液， EDC系羥基膠乳微球偶聯(lián)抗體，成分為1-乙基-3-（3二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽，濃度為2mg/ml；NHS的濃度為1mg/ml；

（Ⅶ）偶聯(lián)緩沖液；

（Ⅷ）抗體溶液：抗-CD63、抗-CD9、抗Glypican-1；濃度為0.5 mg/ml；

（Ⅸ）標準品：已知質(zhì)量的標準Glypican-1+exo樣品溶解于無exosome的血漿中，濃度為1 μg/ml，并稀釋至所需濃度；

（Ⅹ）淬滅緩沖液：濃度為2 mM的硫酸水溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的Glypican-1陽性外泌體濃度的檢測方法，其特征在于，所述納米等離子體增強散射方法的步驟為：在NH2功能化的玻片上，覆蓋50孔聚二甲基硅氧烷膜，形成感應芯片，在感應芯片上用外泌體特異抗體-抗CD63覆蓋，封閉后加入待測樣品孵育，洗板，再加偶聯(lián)了抗CD9抗體的金納米棒和偶聯(lián)了抗Glypican-1抗體的金納米球，孵育，洗板后在暗場顯微鏡下獲得圖像；通過計算機軟件分析整個圖像，以給出指示Glypican-1陽性外泌體濃度的nPES信號的面積比，通過標準品的濃度和相應的nPES信號繪制標準曲線，待檢樣品中的Glypican-1陽性外泌體的水平通過它的信號值并對應標準曲線得到。