[發明專利]一種與結直腸癌轉移及預后相關的分子標記物及其應用

在審

• 申請號: 201710226892.0
• 申請日: 2017-04-06
• 公開（公告）號: CN107099584A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 金焰;傅松濱;吳楠;孫冬琳;孫海明;劉洋
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司11139
• 代理人: 孫皓晨,馬鑫

技術領域

本發明屬于腫瘤生物診斷及治療技術領域，涉及一種新的結直腸癌診斷的腫瘤標記物。更具體地說，公開了一種與結直腸癌診斷與轉移及預后評估相關的血清/組織腫瘤標記物及其應用。該標記物為一種核糖體蛋白類似物RPL22L1(Ribosomal protein L22-like 1)，該標記物及其引物、抗體可用于診斷試劑盒應用，用于結直腸癌轉移發生的輔助診斷和預后評估方案。RPL22L1表達水平的升高可用作診斷和檢測患有結直腸癌、處于轉移發生風險及不良預后的個體生物標記。

背景技術

結直腸癌是具有高發病率和高死亡率的常見惡性腫瘤，多發生肝轉移并嚴重威脅患者生命。盡管近年來結直腸癌的診斷和治療已經取得了顯著的進展，但全世界每年仍有125萬新生結直腸癌患者，有超過60萬結直腸癌患者發生死亡，其五年生存率仍低于50％。轉移是導致結直腸癌患者死亡的主要原因之一，結直腸癌首診患者即有40-50％出現遠端轉移，手術治療后仍有50％以上發生轉移，轉移一旦發生則嚴重影響預后，轉移的早期診斷和治療能夠獲得更好的治療效果并提高患者生存率。但目前關于結直腸癌轉移的分子機制仍尚未明確，且尚無有效的結直腸癌轉移相關分子標記物。

核糖體蛋白類似物RPL22L1(Ribosomal protein L22-like 1)為核糖體蛋白RPL22的旁系同源蛋白，其編碼的基因定位于染色體3q26.3，編碼122個氨基酸。除了參與蛋白質合成，許多核糖體蛋白還具有獨立于核糖體之外的許多功能，核糖體蛋白與許多疾病有關，其中包括多種腫瘤，在肝癌、結直腸癌、卵巢癌等惡性腫瘤中均發現存在核糖體蛋白高表達的現象。

雙微體為1962年在人類結直腸癌中首次發現的，染色體外成對存在的由微小DNA組成的遺傳物質，僅存在于腫瘤細胞中，并攜帶多種癌基因及耐藥基因。我們的前期研究發現RPL22L1位于雙微體上，并發現其在結直腸癌中高表達并能夠促進結直腸癌轉移發生。

本發明在前期研究基礎上認為RPL22L1的表達水平升高與結直腸癌轉移發生及不良預后密切相關，可作為腫瘤標記物應用于結直腸癌轉移發生的檢測診斷中。

發明內容

本發明針對目前臨床結直腸癌及其轉移缺乏有效診斷標記物的情況，提供了一種能夠用于結直腸癌轉移早期診斷及預后評估的分子標記物——核糖體蛋白類似物RPL22L1(Ribosomal protein L22-like 1)，通過檢測RPL22L1基因的表達水平從而達到對結直腸癌轉移進行早期診斷及預后評估的目的。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明通過Oncomine數據庫分析來自GEO和TCGA數據庫中臨床結直腸癌樣本表達譜芯片中RPL22L1的mRNA表達水平，結果發現，在臨床結直腸癌樣本中RPL22L1mRNA表達水平顯著高于癌旁組織。為了進一步確證RPL22L1的表達水平與結直腸癌惡性程度、轉移發生及預后評估的關系，本發明通過RT-qPCR法檢測了10對臨床配對的結直腸癌(1-10T)與癌旁(1-10N)組織中RPL22L1的mRNA表達水平，同時通過Western Blot法以及免疫組化方法檢測了10對臨床配對的結直腸癌(1-10T)與癌旁(1-10N)組織以及病理切片中RPL22L1蛋白表達水平，結果發現在配對結直腸癌樣本中，大多數(80％)配對組織中RPL22L1在癌組織中的表達含量明顯增高，且與病理分級、浸潤深度及轉移顯著相關。更進一步的，本發明通過Kaplan-Meier法單因素分析(Log-rank檢驗)繪制生存曲線分析了RPL22L1表達水平與結直腸癌患者的生存期的關系，結果顯示RPL22L1表達高的患者預后較差，即顯示RPL22L1與不良預后相關。

因此，在上述研究的基礎上，本發明提出了核糖體蛋白類似物RPL22L1(Ribosomal protein L22-like 1)作為分子標記物在制備用于結直腸癌轉移的早期診斷以及預后評估的試劑或試劑盒中的用途。

進一步的，本發明還提出了用于檢測RPL22L1表達水平的試劑在制備用于結直腸癌轉移的早期診斷以及預后評估的試劑或試劑盒中的用途。

在本發明中，優選的，所述的用于檢測RPL22L1表達水平的試劑包括從RNA水平以及蛋白水平檢測的試劑。

其中，優選的，所述的從RNA水平檢測的試劑包括用于RPL22L1qRT-PCR檢測所需的引物，所述引物由上游引物和下游引物組成，在本發明的一個具體實施例中，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。