[發(fā)明專利]DNA過氧化物模擬酶在2-羥基芴化學(xué)發(fā)光檢測中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710225593.5
• 申請日: 2017-04-07
• 公開（公告）號: CN107084974B
• 公開（公告）日: 2019-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁剛;李安;滿燕;靳欣欣;潘立剛
• 申請（專利權(quán)）人: 北京農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究中心
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N1/38
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種應(yīng)用DNA過氧化物模擬酶的2-羥基芴化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將過氧化物模擬酶DNA酶與魯米諾溶液混合并通過漩渦振蕩器均勻；

(2)將待測樣品2-羥基芴用緩沖溶液稀釋后，與H₂O₂溶液混合均勻；

(3)將步驟(1)制備的混合溶液置于化學(xué)發(fā)光檢測池內(nèi)，然后將步驟(2)的混合溶液快速加入到化學(xué)發(fā)光檢測池中，立即進(jìn)行化學(xué)發(fā)光信號檢測；

所述DNA過氧化物模擬酶中的DNA具有G-四聯(lián)體核苷酸序列，

所述DNA過氧化物模擬酶中DNA的序列為PW17。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-羥基芴化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在于，步驟(3)所得的混合發(fā)光體系中，DNA酶的濃度為1-300nM，魯米諾的濃度為0.1-100μM，H₂O₂溶液的濃度為1-10mM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-羥基芴化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述DNA過氧化物模擬酶通過以下方法制備：

S1：將DNA用緩沖溶液溶解，用漩渦振蕩器混勻，并于80-90℃的水浴中處理1-30min，取出，自然冷卻，置于室溫下自然冷卻，備用；

S2：取步驟S1配制的DNA溶液加到離心管中，向其中加入緩沖溶液，孵育0.1-5h后，加入hemin，用漩渦振蕩器混勻，放置0.1-10h，得到DNA過氧化物模擬酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的2-羥基芴化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述的DNA過氧化物模擬酶中DNA與hemin的濃度比為1：1.0-1.5。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項所述的2-羥基芴化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在于，構(gòu)建的混合發(fā)光體系的pH值為7.5-12；所述緩沖溶液由Tris、KClO₄、磷酸、檸檬酸、鹽酸、氯化鉀、KH₂PO₄，K₂HPO₄中的二種或三種配制而得。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的2-羥基芴化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在于，所述混合發(fā)光體系的pH值為8.5-10，所述緩沖溶液由Tris和KClO₄配制而得。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項所述的2-羥基芴化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在于，利用標(biāo)準(zhǔn)梯度濃度的2-羥基芴制備混和發(fā)光體系，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光信號檢測，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，將待測樣品的檢測值帶入計算，對待測樣品的2-羥基芴污染物進(jìn)行定量分析。