[發(fā)明專利]一種用于鑒別楊梅雌雄的分子標(biāo)記、引物對及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710221539.3 | 申請日： | 2017-04-06 |
| 公開（公告）號： | CN108103219B | 公開（公告）日： | 2020-04-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 高中山;王妍;賈慧敏;趙海波;汪國云 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈自軍 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 鑒別 楊梅 雌雄 分子 標(biāo)記 引物 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種用于鑒別楊梅雌雄的分子標(biāo)記，為楊梅雌性特異的基因FT1，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，
所述分子標(biāo)記在用于鑒別楊梅雌雄時的方法包括以下步驟：
（1）對待檢測楊梅植株取樣并提取基因組DNA；
（2）以所述基因組DNA為模板，利用引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
（3）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，
若電泳檢測結(jié)果在470bp和268bp處均有特異性條帶，則待檢測楊梅植株為雌株；
若電泳檢測結(jié)果只在268bp處有特異性條帶，則待檢測楊梅植株為雄株，
所述引物對，包括上游引物和下游引物，核苷酸序列為：
上游引物：5′-GTATCAAATCGATCTTTTC-3′；
下游引物：5′-ACAGCTACCTATTTTGGATT-3′。
2.引物對，包括上游引物和下游引物，其特征在于，核苷酸序列為：
上游引物：5′-GTATCAAATCGATCTTTTC-3′；
下游引物：5′-ACAGCTACCTATTTTGGATT-3′。
3.如權(quán)利要求2所述引物對在鑒別楊梅性別中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述楊梅為楊梅幼苗。
5.如權(quán)利要求2所述引物對在制備用于鑒別楊梅性別的試劑盒中的應(yīng)用。
6.一種包含如權(quán)利要求2所述引物對的試劑盒。
7.如權(quán)利要求6所述試劑盒在鑒別楊梅性別中的應(yīng)用。
8.一種鑒別楊梅性別的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）對待檢測楊梅植株取樣并提取基因組DNA；
（2）以所述基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求2所述引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
（3）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，
若電泳檢測結(jié)果在470bp和268bp處均有特異性條帶，則待檢測楊梅植株為雌株；
若電泳檢測結(jié)果只在268bp處有特異性條帶，則待檢測楊梅植株為雄株。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的體系為：
2×SapphireAmp Fast PCR Master Mix 5 μL
10 μM上游引物 0.5μL
10 μM下游引物 0.5μL
30 ng/μL模板 1μL
ddH2O 3μL。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的條件為：
94℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸10 s，共35個循環(huán)；72℃延伸10 min。
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