[發明專利]一種多重PCR檢測微生態活菌制劑中食源性致病菌的方法在審
| 申請號： | 201710221513.9 | 申請日： | 2017-04-06 |
| 公開（公告）號： | CN106916894A | 公開（公告）日： | 2017-07-04 |
| 發明（設計）人： | 房學迅;李慶超;于大海;楊吉雨 | 申請（專利權）人： | 吉林大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12Q1/10;C12Q1/14;C12R1/19;C12R1/42;C12R1/445;C12R1/125;C12R1/385;C12R1/07;C12R1/685 |
| 代理公司： | 長春市恒譽專利代理事務所(普通合伙)22212 | 代理人： | 李榮武 |
| 地址： | 130012 吉*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 多重 pcr 檢測 生態 制劑 中食源性 致病菌 方法 | ||
1.一種多重PCR檢測微生態活菌制劑中食源性致病菌的方法，其特征在于，所述方法為：根據設計的特異性引物能用多重PCR快速高效的檢測乙型副傷寒沙門氏菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌七種。
2.根據權利要求1所述的一種多重PCR檢測微生態活菌制劑中食源性致病菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟:
1)微生態活菌制劑的再水化：準確稱取微生態活菌制劑0.05g，于EP管中，加入0.95mL滅菌PBS緩沖液，37℃搖床100rpm緩慢搖晃30min；
2)基因組提取：使用基因組提取試劑盒進行提取；
3)引物合成：根據本發明所設計的各種常見致病菌的引物，進行引物合成；
4)用多重PCR致病菌檢測：將處理后的微生態制劑為模板，同時加入乙型副傷寒沙門氏菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌的特異性引物為引物進行多重PCR擴增，七重PCR的反應條件、反應體系如上述表4，表5所示；
5)核酸電泳檢測：上述PCR產物加于2％瓊脂糖凝膠電泳，觀察是否存在致病菌條帶。
3.根據權利要求2所述的一種多重PCR檢測微生態活菌制劑中食源性致病菌的方法，其特征在于：
微生態活菌制劑的各種形式，包括固體顆粒、菌粉、液態等形式，其中液體形式為按比例進行稀釋，同時適用于其他多種食品形式的應用。
4.根據權利要求2所述的一種多重PCR檢測微生態活菌制劑中食源性致病菌的方法，其特征在于：本發明所設計的各種引物的核苷酸序列等具體信息。
5.根據權利要求2所述的一種多重PCR檢測微生態活菌制劑中食源性致病菌的方法，其特征在于：本發明中乙型副傷寒沙門氏菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌的七重PCR的反應條件、反應體系，包括變性、退火、延伸的溫度及時間，反應體系中添加的各種成分及其比例。
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