[發明專利]一種牛角的檢測方法

在審

• 申請號: 201710221362.7
• 申請日: 2017-04-06
• 公開（公告）號: CN108693281A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發明（設計）人: 魏鋒;程顯隆;馬雙成;張倩倩;李明華
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京坦路來專利代理有限公司 11652
• 代理人: 汪送來

1.一種牛角的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括采用高效液相色譜-質譜聯用技術(HPLC-MS)進行牛角檢測的步驟，其中，以牛角對照藥材為對照品，以m/z 680.8±0.5(雙電荷)→617.1±0.5(單電荷)和m/z 680.8±0.5(雙電荷)→817.0±0.5(單電荷)作為檢測離子對。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜的條件為：固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠或辛烷基硅烷鍵合硅膠，流動相A選自甲酸、乙酸、甲酸水溶液或乙酸水溶液中的至少一種，優選自0.1％(v/v)甲酸的水溶液或0.1％(v/v)乙酸的水溶液；流動相B選自乙腈、甲醇或甲酸的乙腈溶液中的至少一種，優選為0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，進行梯度洗脫；

優選地，所述高效液相色譜的條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以0.1％(v/v)甲酸的水溶液為流動相A，以0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液為流動相B，梯度洗脫：0～25分鐘，A 95％→80％，B 5％→20％；25～40分鐘，A 80％→50％，B 20％→50％；40～41分鐘，A50％→1％，B 50％→99％；41～45分鐘，A 1％→1％，B 99％→99％。

3.根據權利要求1-2中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述質譜采用質譜檢測器，電噴霧正離子模式(ESI⁺)，進行多反應監測。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括將所述牛角進行酶解的步驟；優選地，所述酶解包括向牛角中依次加入尿素，二硫蘇糖醇(DTT)，碘乙酰胺(IAA)和酶的步驟；更優選地，所述酶解包括如下步驟：向牛角中加入尿素，再加入DTT，60±5℃加熱30±5min，冷卻，加入IAA，黑暗中放置30±5min，加堿稀釋至10ml，加酶于37℃反應12h以上。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述酶選自胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的至少一種，優選胰蛋白酶。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述堿為碳酸氫銨(NH₄HCO₃)。