[發明專利]一種檢測西蘭花中硝酸根、亞硝酸根含量的方法及應用

在審

• 申請號: 201710220237.4
• 申請日: 2017-04-06
• 公開（公告）號: CN106885865A
• 公開（公告）日: 2017-06-23
• 發明（設計）人: 范寶莉;高暉;尚云濤;王振英;劉曉穎;陳宏;黨光
• 申請（專利權）人: 天津師范大學
• 主分類號: G01N30/34
• 分類號: G01N30/34;G01N30/96
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司12207
• 代理人: 朱紅星

本發明得到天津市科委面上項目（14JCYBJC29900）,天津市農委科技成果轉化與推廣項目（201302030），天津師范大學應用開發基金項目（52XK1505， 52XK1210），基金的資助。

技術領域

本發明屬于天然植物分析技術領域，涉及天然植物中硝酸根、亞硝酸根含量檢測的方法，尤其是西蘭花中硝酸根、亞硝酸根含量檢測的方法。

背景技術

西蘭花是十字花科蕓薹屬中以花球為產品的一種重要的甘藍類蔬菜，含有芥子油苷、多酚、維生素C和類胡蘿卜素等多種生物活性物質，具有很高的營養價值。西蘭花中所含有的芥子油苷是一類含硫和氮的植物次生代謝產物。十字花科植物中含有豐富的芥子油苷，其降解產物可以作為致癌物的阻斷劑，誘導醌還原酶等解毒酶的活性。多酚物質也是西蘭花中重要的生物活性物質，在抗誘變、抗腫瘤、抗病毒、抗微生物及抗衰老等方面都具有顯著的作用，被認為是潛在的抗突變和抗癌物質。西蘭花中維生素C、類胡蘿卜素等植物天然抗氧化物質含量豐富，這些物質具有清除自由基的作用。可見西蘭花具有較強的抗氧化能力。

蔬菜作為容易積累硝酸鹽的植物，各類蔬菜的硝酸鹽含量受到廣泛關注。部分學者認為適量的硝酸鹽攝入可能對人體有益，但更多的研究表明大量攝入硝酸鹽含量較高的蔬菜會增加人體患腸胃癌、高鐵血紅蛋白癥等疾病的幾率。蔬菜中的硝酸鹽在合適的條件下也可轉化為亞硝酸鹽，而亞硝酸鹽毒性較強，是強致癌物亞硝胺的前體，亞硝酸鹽可與食物中或體內的仲胺類物質反應生成亞硝胺，從而誘發消化系統癌變。

植物體內硝酸鹽的積累是其生長過程中的自然現象，受到植物遺傳特性、礦質營養狀況及生長環境等諸多因素的影響。我國地域廣闊，各地區之間的氣候環境存在較大差異。我國各地蔬菜的栽培方式不同，具有鮮明的地域性特點。在實際農業生產中農民為追求提高蔬菜產量高產而盲目增大氮肥施用量，蔬菜采收后的處理和貯運方式不當等都將加劇蔬菜硝酸鹽的積累。

目前蔬菜中硝酸鹽和亞硝酸鹽的測定方法主要有比色法和離子色譜法。其中比色法操作繁瑣，分析效率低，重現性差，所用化學試劑具有一定的毒性，而離子色譜法具有靈敏度高、重現性好、線性范圍廣、分析效率高、環境友好等特點，已被廣泛應用于蔬菜中無機陰離子的檢測。但目前離子色譜法用于檢測蔬菜中硝酸鹽和亞硝酸鹽主要采用等度淋洗，當樣品中含有較高濃度的氯離子時會嚴重干擾亞硝酸根離子的定量分析。而采用梯度淋洗可以顯著增強氯離子與亞硝酸根離子的分離度，使之在氯離子濃度高于亞硝酸根離子濃度1000倍甚至更高時仍可以達到有效分離并精確定量。

鑒于以上不足，為降低硝酸鹽和亞硝酸鹽攝入對人體健康的潛在威脅，有必要發明一種精確分析西蘭花中硝酸根和亞硝酸根含量的新方法，使之能夠簡便、穩定、可重復、全面、精確的評價西蘭花中硝酸根和亞硝酸根的積累狀況，從而既加強了對西蘭花食品安全的監控，又能提高西蘭花質量的全面評估和控制，彌補了現有檢測方法的不足，使之更加科學、完善。

發明內容

本發明要解決的技術問題是針對現有西蘭花品質管理檢測方法的不足，而提供一種檢測西蘭花中硝酸根、亞硝酸根含量的方法。該方法通過將西蘭花花球制備成待測溶液，經固相萃取技術分離凈化，再經由離子色譜儀分析檢測，通過與標準溶液對比，以保留時間定性，峰面積定量。

本發明公開了一種梯度淋洗離子色譜法檢測西蘭花中硝酸根、亞硝酸根含量的方法，其特征在于：該方法按如下的步驟進行：

（1）西蘭花待測溶液的制備：稱取20g西蘭花花球，超純水洗凈、晾干，切碎，加100ml超純水，用組織破碎機攪碎，加超純水定容至250ml，室溫條件下超聲提取15min，10000×g離心15min，經0.45μm濾膜過濾，作為待測溶液；

（2）西蘭花供試品溶液的制備：C18固相萃取小柱經5 ml甲醇、10ml超純水活化，平衡15min；將待測溶液以4ml/min速度過柱，棄去最先流出的3ml溶液并收集余下溶液，最后經0.45μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液；

（3）標準溶液配制

精確配制NO₃^-，NO₂^-混合標準儲備液，濃度均為1000mg/L，精密移取10、5、1、0.5、0.1ml混合標準儲備液用超純水定容至100ml，配制成系列標準溶液；