[發明專利]抗體片段修飾的微梁制備方法和基于抗體片段修飾的微梁免疫傳感檢測系統

在審

• 申請號: 201710218984.4
• 申請日: 2011-08-19
• 公開（公告）號: CN106872693A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 張青川;吳尚犬;鄔林;伍小平
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 穆彬

1.一種制備微懸臂梁的方法，包括以下步驟：

1)提供抗體和帶有鍍金層的微懸臂梁；

2)二硫鍵還原步驟：使用二硫鍵還原劑處理所述抗體，使得所述抗體鉸鏈區的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個對稱的帶有巰基的半抗體片段；

3)固定步驟：將步驟2)獲得的半抗體片段與鍍有金層的微懸臂梁結合，得到鍍金表面上固定有所述半抗體片段的微懸臂梁。

2.一種制備微懸臂梁的方法，包括以下步驟：

1)提供抗體和帶有鍍金層的微懸臂梁；

2)酶解步驟：用蛋白酶將所述抗體裂解成F(ab’)₂片段和多個小分子片段，所述蛋白酶選自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其組合；

3)二硫鍵還原步驟：使用二硫鍵還原劑處理所述F(ab’)₂片段，使得所述抗體鉸鏈區的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個對稱的帶有巰基的Fab’片段；

4)固定步驟：將步驟3)獲得的Fab’片段與鍍有金層的微懸臂梁結合，得到鍍金表面上固定有所述Fab’片段的微懸臂梁。

3.一種制備微懸臂梁的方法，包括以下步驟：

1)提供抗體和帶有鍍金層的微懸臂梁；

2)二硫鍵還原步驟：使用二硫鍵還原劑處理所抗體，使得所述抗體鉸鏈區的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個對稱的帶有巰基的半抗體片段；

3)酶解步驟：用蛋白酶將所述半抗體片段裂解成Fab’片段和多個小分子片段，所述蛋白酶選自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其組合；

4)固定步驟：將步驟3)獲得的Fab’片段與鍍有金層的微懸臂梁結合，得到鍍金層上固定有所述Fab’片段的微懸臂梁。

4.一種應力傳感元件，其包括基于應力的微懸臂梁，所述微懸臂梁的鍍金層上固定有抗體的半抗體片段或Fab’片段，所述應力改變，從而導致微梁彎曲變形，通過光學或電學方法檢測這種變形的過程，可得到免疫生化反應的實時信息。

5.一種基于應力的微懸臂梁免疫傳感檢測系統，其包括權利要求4的應力傳感元件，所述應力改變，從而導致微梁彎曲變形，通過光學或電學方法檢測這種變形的過程，可得到免疫生化反應的實時信息。

6.一種使用微懸臂梁傳感檢測系統免疫傳感檢測待測樣品的方法，包括以下步驟：

1)提供對靶抗原特異的抗體和微懸臂梁傳感檢測系統，所述微懸臂梁傳感檢測系統包括反應池和帶有鍍金層的基于應力的微懸臂梁；

2)使用二硫鍵還原劑處理所述抗體，使得所述抗體鉸鏈區的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個對稱的帶有巰基的半抗體片段；

3)將步驟2)獲得的半抗體片段與鍍有金層的微懸臂梁結合，得到鍍金層上固定有所述半抗體片段的微懸臂梁；

4)將步驟3)獲得的固定有所述半抗體片段的微懸臂梁固定到微懸臂梁傳感檢測系統的反應池中；

5)將待測樣品加入至步驟4)獲得的微懸臂梁傳感檢測系統中，檢測待測樣品中是否存在所述靶抗原；

所述應力改變，從而導致微梁彎曲變形，通過光學或電學方法檢測這種變形的過程，可得到免疫生化反應的實時信息。

7.一種使用微懸臂梁傳感檢測系統免疫傳感檢測待測樣品的方法，包括以下步驟：

1)提供對靶抗原特異的抗體和微懸臂梁傳感檢測系統，所述微懸臂梁傳感檢測系統包括反應池和帶有鍍金層的基于應力的微懸臂梁；

2)用蛋白酶將所述抗體裂解成F(ab’)₂片段和多個小分子片段，所述蛋白酶選自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其組合；

3)使用二硫鍵還原劑處理所述F(ab’)₂片段，使得所述抗體鉸鏈區的二硫鍵還原成巰基，從而得到兩個對稱的帶有巰基的Fab’片段；

4)將步驟3)獲得的Fab’片段與鍍有金層的微懸臂梁結合，得到鍍金層上固定有所述Fab’片段的微懸臂梁；

5)將步驟4)獲得的固定有所述Fab’片段的微懸臂梁固定到微懸臂梁傳感檢測系統的反應池中；

6)將待測樣品加入至步驟5)獲得的微懸臂梁傳感檢測系統中，檢測待測樣品中是否存在所述靶抗原；

所述應力改變，從而導致微梁彎曲變形，通過光學或電學方法檢測這種變形的過程，可得到免疫生化反應的實時信息。