[發(fā)明專利]一種適用于不同種源的黑果枸杞的高效快速繁殖方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710216881.4
• 申請(qǐng)日: 2017-04-05
• 公開（公告）號(hào): CN106962193B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳金煥;劉麗萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京市廣友專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 11237
• 代理人: 張仲波

本發(fā)明涉及一種適用于不同種源的黑果枸杞的高效快速繁殖方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，其步驟如下：(1)無菌苗制備：收集不同種源的黑果枸杞種子，消毒處理后，接種于MS培養(yǎng)基上，長出的小苗待用；(2)嫩莖段誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基的篩選：利用莖段誘導(dǎo)叢生芽中激素種類及梯度設(shè)置，進(jìn)行嫩莖段誘導(dǎo)不定芽的分化培養(yǎng)，篩選培養(yǎng)基條件；(3)生根培養(yǎng)基的篩選：利用步驟(2)得到的嫩芽進(jìn)行誘導(dǎo)生根，篩選培養(yǎng)基條件。本發(fā)明摸索出一套簡潔有效、適合不同種源黑果枸杞快速繁育的方法，為以后黑果枸杞無菌快繁工作提供了方向，為未來黑果枸杞的大規(guī)模工廠化育苗奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種黑果枸杞的快速繁殖方法，特別涉及一種適用于不同種源的黑果枸杞的高效快速繁殖方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)屬于茄科、枸杞屬多年生灌木，具有耐旱、耐鹽堿的特性，是集鹽堿地綠化價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值、藥用價(jià)值等為一體的野生灌木樹種，在生態(tài)建設(shè)和區(qū)域經(jīng)濟(jì)發(fā)展中有巨大的應(yīng)用前景。黑果枸杞主要分布在我國西部，集中在青海的柴達(dá)木盆地(格爾木、都蘭、德令哈等地區(qū))，甘肅河西走廊(瓜洲、玉門、靖遠(yuǎn)等地區(qū))以及內(nèi)蒙的額濟(jì)納旗、阿拉善左旗和右旗，各自然群體具有豐富的表型多樣性和遺傳多樣性。

由于近年來野生黑枸杞高額利潤帶來的野蠻采摘，黑果枸杞野生資源已瀕臨滅絕，保護(hù)和利用各地區(qū)野生資源迫在眉睫。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)既可以保留原有植株的優(yōu)良性狀，又可將優(yōu)良單株快速繁殖成無性系，迅速在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

目前，黑果枸杞快速繁殖研究方面，有如下三個(gè)方面：

(1)以嫩莖段為外植體的快速繁殖體系研究：

浩仁塔本等人在《植物生理學(xué)通訊》(2005，41(5):631-631)中公開的“黑果枸杞的組織培養(yǎng)”一文中，首次發(fā)表了有關(guān)黑果枸杞組織培養(yǎng)的研究報(bào)告，利用帶腋芽的嫩莖段進(jìn)行MS(MS培養(yǎng)基：Murashige and Skoog培養(yǎng)基)+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)1.0mg/L+NAA(萘乙酸)0.2mg/L+2.5％蔗糖+0.8％瓊脂和MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)0.5mg/L+NAA0.2mg/L+2.5％蔗糖+0.8％瓊脂兩種誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的比較，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分裂素高時(shí)，易產(chǎn)生愈傷組織，不定芽數(shù)量少，且芽莖較短，葉片多，不適合繼代。兩種不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L和MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L，但蔗糖瓊脂均減半(即蔗糖12.5％，瓊脂0.4％)；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg/L，約20天后生根，生根率88％左右。杜敏智在2015年公開的“大果黑果枸杞組培快繁技術(shù)體系的研究”一文中，以大果黑果枸杞為研究對(duì)象，采用嫩莖段器官為材料，比較了ZT(異戊烯氨基嘌呤)和6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)與IBA(吲哚丁酸)不同濃度(0.5-1.75mg/L)組合下誘導(dǎo)分化的效果，得出6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)玻璃化更嚴(yán)重，ZT與IBA組合更適合黑果枸杞增殖培養(yǎng)(瓊脂濃度5.5g/L)，IBA激素1mg/L為該研究中得到的最適濃度。針對(duì)玻璃化現(xiàn)象對(duì)蔗糖含量、瓊脂含量以及光照強(qiáng)度進(jìn)行調(diào)整，該研究認(rèn)為隨著瓊脂含量增高，光照強(qiáng)度增加可一定程度減輕玻璃化，通過ZT濃度循環(huán)調(diào)整，也可達(dá)到減輕繼代過程中更容易出現(xiàn)的玻璃化的目的。胡相偉等人在《甘肅農(nóng)業(yè)科技》(2015(5):73-74)發(fā)表的“黑果枸杞組織培養(yǎng)技術(shù)”一文中公開：用一年生休眠枝帶一個(gè)芽的小莖段為材料得出，各階段培養(yǎng)基成分含量依次為：芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+0.5mg/L6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)+30mg/g蔗糖+6mg/g瓊脂；繼代培養(yǎng)基：MS+0.3mg/L6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)+0.05mg/L NAA+30mg/g蔗糖+6mg/g瓊脂；生根培養(yǎng)基：1/2MS+0.5mg/LIAA(吲哚乙酸)+15mg/g蔗糖+6mg/g瓊脂。該研究下最適生根培養(yǎng)基在約20天長出不定根。馬彥軍等人在《林業(yè)實(shí)用技術(shù)》(2015(6):26-28)中發(fā)表的“黑果枸杞組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究”，文中公開了：采用1年生苗的莖段誘導(dǎo)愈傷，其中MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L愈傷組織誘導(dǎo)率最高，質(zhì)量最好，愈傷組織培養(yǎng)30天左右，有叢生芽長出；當(dāng)NAA濃度為0.2mg/L，6-BA濃度在0.1-0.4mg/L之間時(shí)，隨著6-BA濃度增大，不定芽的出芽數(shù)量在減少，增殖系數(shù)降低，6-BA濃度為0.1mg/L時(shí)增殖系數(shù)最大，為3.58；6-BA濃度達(dá)到0.4mg/L時(shí)，增殖系數(shù)僅為1.93，而且在基部形成大量愈傷組織，不定芽短縮，透明、玻璃化現(xiàn)象嚴(yán)重。NAA 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L的組合，黑果枸杞組培苗生根率、平均根數(shù)及平均根長最大，依次分別為93.3％，12.5條，6.8cm。